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Etude fonctionnelle et structurale de p14/n5 du virus de la fievre de la vallee du rift.

par Magali Boissiere

Thèse de doctorat en Chimie

Sous la direction de Marie Flamand.

Thèses en préparation à Sorbonne Paris Cité , dans le cadre de MÉDICAMENT TOXICOLOGIE CHIMIE IMAGERIES , en partenariat avec DEPARTEMENT VIROLOGIE (INSTITUT PASTEUR) (equipe de recherche) depuis le 23-09-2013 .


  • Résumé

    La fièvre de la vallée du Rift (FVR), transmise par piqures de moustiques (Aedes aegypti) à des hôtes mammifères, est une zoonose à fort taux de mortalité chez les jeunes ruminants. Chez l’Homme les symptômes sont très variables allant de l’hépatite à la fièvre hémorragique. Le virus de la FVR (vFVR) (Phenuiviridae, Phlebovirus) code des protéines non structurales agissant comme facteurs de virulence chez les hôtes mammifères (NSs, NSm) ou favorisant la propagation du virus chez les vecteurs arthropodes (P78) [Ikegami et al, 2012; Kreher et al, 2014]. Dans le modèle murin, il a été confirmé que les sites majeurs de réplication virale sont la rate et le foie [Gommet et al, 2011]. Notre équipe a également décrit qu’un virus mutant n’exprimant pas NSm (KO (def-NSm) est atténué chez la souris C57BL/6 et est produit à des titres inférieurs dans la lignée de macrophages murins RAW264.7 [Kreher et al, 2014]. Dans la présente étude, nous nous intéressons aux fonctions de la protéine NSm dans le modèle murin de l’infection. Nous évaluons ainsi le phénotype du virus mutant def-NSm dans des macrophages péritonéaux primaires murins. Grâce à des analyses protéomiques réalisées par spectrométrie de masse nous nous intéressons à la réponse des macrophages suite à l’infection par le virus sauvage ou def-NSm. Ainsi, nous avons identifié un rôle protecteur de NSm face à la production d’espèces réactives de l’oxygène et à la dépolarisation de la membrane mitochondriale. De plus, la présence de NSm réprime l’accumulation de gouttelettes lipidiques induite par l’infection. Ces résultats indiquent un possible mécanisme d’action de la protéine NSm sur l’induction de l’autophagie et la stimulation du métabolisme mitochondrial.

  • Titre traduit

    Fonctional analysis of the rift valley fever virus NSm virulence factor by a comparative proteomic analysis of virus-infected cells


  • Résumé

    Rift valley fever virus (RVFV) (Phenuiviridae, Phlebovirus) is endemic in Africa and the Arabian Peninsula. RVFV affects primarily ruminants with a high mortality rate in fetuses and newborns, which has a high impact on local economy [Bird BH et al, 2016]. In humans, symptoms include hepatitis, encephalopathy and hemorrhagic fever. RVFV encodes several nonstructural proteins known to act as virulence factors in mammalian hosts (NSs and NSm) or to promote viral dissemination in arthropod vectors (NSm-GN) [Ikegami T et al, 2012; Kreher F et al, 2014]. The present study focuses on the functional characterization of the NSm protein. NSm is a 14 kDa protein localized at the surface of mitochondria in infected cells [Terasaki K et al, 2013]. Our team previously showed that a mutant virus lacking NSm expression (del-NSm) is attenuated in mice [Terasaki K et al, 2013]. To further investigate the underlying mechanisms of pathogenicity, we used label-free quantitation by mass-spectrometry and compared the proteomes of primary macrophages infected by either wild-type or del-NSm viruses. The results show that NSm acts cooperatively with the NSs virulence factor and modulates the expression level of cellular proteins involved in cell-mediated immune response, oxidative phosphorylation and fatty acid metabolism. Our study reveals that NSm exerts a protective effect against mitochondrial ROS production and membrane depolarization and lipid droplets accumulation, pointing to a complex regulation of the mitochondrial platform.