La carboxylestérase (pl 5,1) intestinale du porc : ponts disulfure, formes moléculaires et acylation

Carboxylase (pl 5. 1) from porcine intestine : disulfide bridges, molecular forms and acylation

• Auteur / Autrice : Sylvie Smialowski-Fleter
• Direction : Antoine Puigserver
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biochimie. Nutrition, aspects moléculaires et cellulaires
• Date : Soutenance en 2001
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 3

Mots clés

Mots clés contrôlés

Acylation

Protéines kinases

Thiols

Biologie moléculaire

Porc

Cholinestérases

Résumé

L'étude des fonctions thiols de la carboxylestérase intestinale de porc (CEIP) a conduit, d'une part, à l'identification de deux ponts disulfure intrachaînés, nommés Cys70-Cys99 et Cys256-Cys267 et, d'autre part, à la mise en évidence d'une fonction thiol (Cys71) bloquée. Nous observons que les deux ponts disulfure sont présents dans les cholinestérases bien que la CEIP ne présente que 35 % d'identité de séquence avec celles des cholinestérases. Le premier pont disulfure ou boucle O (omega). Par analogie aux cholinestérases, semble être important pour la conformation active de l'enzyme en raison de son inactivation dans des conditions réductrices. Enfin, la CEIP est capable d'hydrolyser les substrats cholinergiques alors que les résidus essentiels impliqués dans l'attachement de ces substrats, présents entre autre dans la boucle O (omega) des cholinestérases, ne sont pas conservés dans la CEIP. . .

The study of thiol groups of porcine intestinal carboxylesterase (PICE) led us on the one hand, to the identification of two intra-chain disulfide bridges, namely Cys70-Cys99 and Cys256-Cys267 and, on the other hand, to the identification of a blocked sulfhydryl group (Cys71). We observe that the two disulfide bridges are present in the cholinesterase family,although PICE showed only about 35 % identity with these proteins. The first disulfide bridge or loop O (omega), by analogy with the cholinesterases, seems to be important for the enzyme conformation because of its inactivation under reducing conditions. Lastly, PICE was also found to hydrolyze cholinergic substrates, although essential residues responsible for substrate binding in cholinesterases were lacking in loop O (omega) of PICE. Other amino acid residues in PICE may therefore be responsible for the binding of cholinergic substrates to the enzyme. Using the anti-peptide K281-E296 of PICE polyclonal antibodies, we showed that the enzyme was only found to be expressed in the porcine small intestine, liver, submaxillary and parotid glands, kidney cortex, lungs, and cerebral cortex, which have in particular a secretory function. In the intestinal mucosa, the pi 5. 1 enzyme was distributed in several subcellular fractions (microsomal, mitochondrial, soluble), as well as in the microvillar fraction. . .