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Thèse soutenue

Expression de l'hormone parathyroidienne humaine dans escherichia coli

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Auteur / Autrice : GILLES MORELLE
Direction : Roger Durand
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
Date : Soutenance en 1991
Etablissement(s) : Clermont-Ferrand 2

Résumé

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L'expression de l'hormone parathyroidienne humaine dans escherichia coli a ete etudiee par l'analyse comparative de plusieurs parametres: le choix du promoteur, la longueur et la composition de la sequence intermediaire entre le site de fixation des ribosomes et le codon de depart de la proteine, l'utilisation de regions 5 non codante efficaces dans la traduction de genes heterologues, la modification de la region 5 codante du gene, ou, le couplage en phase de lecture du gene par son extremites 5 en 3 de genes fortement traduits qui permettent soit la secretion et la maturation du produit d'expression, soit sa precipitation intracellulaire. Les modifications apportees ont permis une amelioration du niveau d'expression de l'hormone mature d'un facteur environ 300, la parthormone representant alors 4,3% des proteines solubles totales. Dans le cas d'une expression sous la forme d'une proteine chimere, le produit d'expression represente 50% des proteines totales soit plus de 8% d'hormone pure. Si le but fixe: l'expression de l'hormone parathyroidienne humaine a ete atteint, il n'a pas ete possible de produire de tres grande quantites de cette hormone sous forme mature. La production de l'hormone modifiee ne presente aucun probleme majeur. Si cette molecule peut difficilement etre utilisee a des fins therapeutiques, elle devrait permettre, grace a son activite biologique in vitro comparable a la proteine naturelle, de mieux comprendre le mode d'action de la parathormone et les relations proteine-proteine a l'origine de ses activites antagonistes anabolique et catabolique ainsi que de preciser les domaines fonctionnels lies a ces differentes activites