Thèse soutenue

Caractérisation des nanoparticules siRNA-Squalène et étude de leur transport et internalisation
FR  |  
EN
Accès à la thèse
Auteur / Autrice : Marie Caillaud
Direction : Liliane Massade
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Recherche clinique, innovation technologique, santé publique
Date : Soutenance le 16/12/2020
Etablissement(s) : université Paris-Saclay
Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Signalisations et réseaux intégratifs en biologie
Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Maladies et hormones du système nerveux (Le Kremlin-Bicêtre, Val-de-Marne ; 2020-....)
référent : Faculté de médecine
Jury : Président / Présidente : Didier Desmaële
Examinateurs / Examinatrices : Corinne Chanéac, Chantal Pichon, Juliette Vergnaud-Gauduchon, Miryana HéMADI
Rapporteurs / Rapporteuses : Corinne Chanéac, Chantal Pichon

Résumé

FR  |  
EN

Les siRNA constituent une thérapie ciblée pour les cancers à oncogène de fusion (réarrangement chromosomique se produisant uniquement dans les cellules tumorales) et les maladies monogéniques neurodégénérative comme la maladie de Charcot-Marie-Tooth (pathologie démyélinisante du système nerveux périphérique). En effet, les siRNA sont spécifiques de la séquence d’ARNm d’un gène cible à inhiber, mais sont instables dans les milieux biologiques. Pour les protéger de la dégradation et les véhiculer, nous avons conjugué, par chimie clic sans cuivre le brin sens du siRNA à un lipide naturel précurseur du cholestérol, le squalène (SQ). Le bioconjugué résultant est ensuite hybridé avec le brin antisens puis nanoprécipité. Notre étude s’est intéressée à étudier les caractéristiques physicochimiques des NPs et à montrer les interactions se produisant in vivo avec le sérum. La compréhension des mécanismes impliqués dans le transport et l’internalisation des NPs a pour objectif de proposer une nanomédecine personnalisée basée sur l’utilisation des NPs siRNA-SQ. Nos résultats montrent qu’en solution aqueuse, les NPs siRNA-SQ ont un diamètre d’environ 200 nm de diamètre, sont chargées négativement (potentiel ζ ~ -35 mV) et de forme sphérique. Par des méthodes physicochimiques et biologiques, nous montrons que les NPs siRNA-SQ interagissent avec les deux principales composantes du sang, l’albumine et les lipoprotéines de basse densité, permettant leur transport vers les tissus cibles (tumeurs et nerfs périphériques). Les NPs siRNA-SQ ont montré une efficacité thérapeutique dans différentes modèles pathologiques corrélée avec une inhibition des gènes cibles. Cependant, in vitro, aucune activité inhibitrice n’a été observée sans utilisation d’un agent transfectant. Nos expériences montrent que la charge négative de ces NPs empêche leur internalisation par répulsion électrostatique avec la membrane cellulaire également chargée négativement. En présence des composantes du sérum, la charge négative des NPs siRNA-SQ est neutralisée. Pour conclure, nous montrons qu’après injection intraveineuse, les NPs siRNA-SQ interagissent avec les composantes majeures du sang, transportées par les lipoprotéines pour être internalisées dans le tissu pathologique.