Thèse soutenue

La protéine de choc thermique Gp96 dans les macrophages au cours du stress du RE : Interaction avec le complément C3
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Auteur / Autrice : Killian Chaumonnot
Direction : Évelyne Kohli
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biochimie et biologie moléculaire
Date : Soutenance le 08/09/2020
Etablissement(s) : Bourgogne Franche-Comté
Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Environnements, Santé (Dijon ; Besançon ; 2012-....)
Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Lipides, Nutrition, Cancer (LNC) (Dijon)
Etablissement de préparation : Université de Bourgogne (1970-....)
Jury : Président / Présidente : Carmen Garrido
Examinateurs / Examinatrices : Marie-Agnès Dragon-Durey
Rapporteurs / Rapporteuses : Christian Drouet, Annabelle Prado Dupont

Mots clés

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Résumé

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La protéine de stress Gp96, est une protéine du réticulum endoplasmique (RE) de la famille des HSP90, exprimée dans toutes les cellules. En situation de stress du RE, elle est induite et peut alors être exprimée au niveau membranaire et extracellulaire. Gp96 est connue pour moduler de manière ambivalente les réponses immunitaires, ayant des effets à la fois pro- et anti-inflammatoires. Bien qu’elle ait été montrée nécessaire pour la tolérance au microbiote des macrophages intestinaux, son rôle n’a pas été pas élucidé au niveau moléculaire. De plus, ses effets dans les macrophages en situation de stress du RE n’est pas connu, malgré leur implication dans de nombreuses pathologies. Dans ces travaux, nous montrons dans un premier temps que Gp96 est exprimée à la membrane des macrophages M2 et non des macrophages M1 dérivés de monocytes du sang périphérique de volontaires sains. Nous mettons en évidence que le stress du RE, généré par la perturbation de l’homéostasie calcique induite par la thapsigargine (Tg), a pour conséquence un switch du phénotype M2 vers un profil pro-inflammatoire dépendant de Gp96 fonctionnelle. Ce switch est associé à la diminution de l’expression membranaire de Gp96 et à sa sécrétion. Dans un second temps, nous démontrons que Gp96 interagit avec le complément C3 intracellulaire dans les macrophages M1 et M2. Cette interaction est plus importante dans les macrophages M2 stressés comparé aux M2 non stressés et, C3b, le fragment issu du clivage de C3, est présent uniquement dans le surnageant de culture des M2 stressés, et a pu de plus être co-immunoprécipité avec Gp96. Enfin, comme Gp96, le fragment inactivé de C3b, iC3b, est détecté uniquement à la membrane des M2 non stressés et sa présence dépend de Gp96 fonctionnelle. Ces résultats suggèrent que Gp96 membranaire et iC3b pourraient être des marqueurs des macrophages M2 anti-inflammatoires. Ils montrent que Gp96 est impliquée dans la modulation du phénotype M2 vers un profil pro-inflammatoire induite par une perturbation de l’homéostasie du calcium. Cet effet pourrait être lié à sa capacité à interagir avec le complément C3 dont les fragments de clivage C3a et C3b ont des effets pro-inflammatoires