Autopsie analytique des perturbations lipidiques de cellules placentaires exposées aux phtalates

Analytical analyses of lipid disruptions of placental cells exposed to phthalates

• Auteur / Autrice : Julia Petit
• Direction : Olivier Laprévote
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Chimie analytique
• Date : Soutenance le 01/02/2017
• Etablissement(s) : Sorbonne Paris Cité
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Médicament, toxicologie, chimie, imageries (Paris ; 2014-....)
• Partenaire(s) de recherche : établissement de préparation : Université Paris Descartes (1970-2019)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Synthèse et structure de molécules d'intérêt pharmacologique (Paris ; 1998-2018)
• Jury : Président / Présidente : Pierre Chaminade
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Pierre Chaminade, Valérie Pichon-Comparot, Christophe Junot, Thierry Fournier, Nicolas Auzeil
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Valérie Pichon-Comparot, Christophe Junot

Mots clés

Mots clés contrôlés

Lipides -- Métabolisme

Foetus -- Effets des produits chimiques

Phtalates

Spectrométrie de masse

Chromatographie en phase liquide

Transcriptome

Lipides

Placenta

Mots clés libres

Placenta

Lipides

Analyse lipidomique

Analyse transcriptomique

Analyses statistiques multivariées

Chromatographie liquide

Spectrométrie de masse

Placenta

Lipids

Lipidomic analysis

Transcriptomic analysis

Multivariate statistical analyses

Liquid chromatography

Mass spectrometry

Résumé

Durant la grossesse, l'exposition à des contaminants chimiques environnementaux peut conduire à des effets néfastes sur le développement du foetus. Ces toxiques peuvent agir directement sur le foetus ou via un tissu essentiel à son développement, le placenta. Les phtalates, plastifiants utilisés par de nombreuses industries et dont le plus abondant est le di(2-éthylhexyl)phtalate (DEHP), ont un effet reprotoxique avéré chez l'animal et fortement suspecté chez l'être humain. La reprotoxicité du mono(2-éthylhexyl)phtalate (MEHP), métabolite endogène du DEHP, tient au fait qu'il s'agit d'un ligand exogène du récepteur nucléaire activé par les proliférateurs de peroxysomes PPARg, dont il provoque l'activation, entraînant alors des modifications de l'expression de certains gènes impliqués dans la lipogenèse et essentiels à la physiologie placentaire. Ces modifications peuvent atteindre différentes classes de lipides tels que les glycérophospholipides, glycérolipides, acides gras, stérols, etc. Afin de caractériser les modifications du lipidome provoquées par le MEHP, des cellules JEG-3, lignées cellulaires issues de placenta humain et modèle de celui-ci, ont été incubées en présence de ce contaminant. Des analyses du lipidome de ces cellules (analyse lipidomique globale, des eicosanoïdes et des oxystérols) ont ensuite été réalisées par UPLC MS afin de rechercher d'éventuelles perturbations dues à l'exposition au MEHP. Les changements du lipidome observés ont ensuite permis d'orienter une analyse transcriptomique vers certains des gènes codant pour les enzymes impliquées dans le métabolisme lipidique placentaire. Enfin, l'obtention de cellules issues de cultures primaires de trophoblastes a permis de réaliser une nouvelle analyse lipidomique et de comparer les résultats obtenus à ceux de la lignée cellulaire.

During pregnancy, exposition to environmental contaminants can lead to adverse effects on fetal development. These toxics might directly impact the fetus by crossing the placenta. Among phthalates, a group of industrial chemicals widely used in plastic materials, di(2-ethylhexyl)phthalate (DEHP) is the most abundant and is known to cause proven toxicity on animals reproductive system and suspected one in humans. Reprotoxicity of mono(2-ethylhexyl)phthalate (MEHP), DEHP endogenous main metabolite, comes from its ability to interact with the peroxisome proliferator activated-receptor PPARg and to activate this later, thus leading to expression disruption of genes involved in lipogenesis and placental development. These changes may impact several lipid classes such as glycerophospholipids, glycerolipids, fatty acids, sterols, etc. In order to study lipid disruptions caused by MEHP, JEG-3 cells stem from a human placental cell line, were incubated with the contaminant. Analyses of these cells lipidome (lipidomic, eicosanoids and oxysterols analyses) were realized by UPLC-MS to reveal potential disruptions due to MEHP incubation. The reported lipid changes enabled to target a following transcriptomic analysis on some genes coding for enzymes involved in placental lipid metabolism. Finally, cells stem from trophoblasts primary cultures were obtained to conduct a novel lipidomic analysis and results were compared to those of the cell line