Etude structurale et fonctionnelle des complexes multi-protéiques de la voie de réparation NHEJ chez l’homme
Auteur / Autrice : | Jérémy Amram |
Direction : | Jean-Baptiste Charbonnier |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Biochimie |
Date : | Soutenance le 02/07/2015 |
Etablissement(s) : | Paris 11 |
Ecole(s) doctorale(s) : | Ecole doctorale Innovation Thérapeutique : du Fondamental à l'Appliqué (Châtenay-Malabry, Haut-de-Seine ; 2000-2015) |
Partenaire(s) de recherche : | Laboratoire : Laboratoire de biologie structurale et radiobiologie (Gif-sur-Yvette, Essonne) |
Jury : | Président / Présidente : Philippe Minard |
Examinateurs / Examinatrices : Jean-Baptiste Charbonnier, Philippe Minard, Marc Delarue, Bertrand Castaing, Sophie Quevillon-Cheruel, Xavier Veaute | |
Rapporteurs / Rapporteuses : Marc Delarue, Bertrand Castaing |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Résumé
La voie de réparation NHEJ (Non-Homologous End-Joining) est une voie majeure de réparation des cassures double-brin chez l’homme. Les protéines de cette voie interagissent et forment des complexes dynamiques dont les mécanismes moléculaires sont encore largement méconnus. Nous avons dans un premier temps mis au point des protocoles de production à l’échelle de plusieurs milligrammes des protéines cœur de la voie NHEJ en cellules d’insecte à l’aide du système MultiBac. Nous avons ainsi purifié les complexes Ku70/Ku80 et Ligase4/XRCC4 et les protéines Cernunnos et Artemis à homogénéité. Des essais de cristallisation, des études par SAXS et des analyses par microscopie électronique ont été réalisés sur différents complexes formés par ces protéines cœur du NHEJ. Nous avons également caractérisé par chromatographie d’exclusion de taille et calorimétrie, les interactions effectuées entre les protéines de la voie NHEJ. L’ensemble de ces travaux a permis d’établir des bases biochimiques solides en vue des études structurales et fonctionnelles de la voie NHEJ chez l’homme.