Aptamères ADN : du Cell-SELEX à l'imagerie

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par Olivier Martinez

Thèse de doctorat en Biologie structurale et fonctionnelle

Soutenue en 2013

Résumé

Les aptamères ADN sont des séquences simple-brins capables de se lier spécifiquement à une cible. Ils constituent de nouveaux outils pour la détection et/ou l'inhibition de molécules biologiques. Ce travail s'inscrit dans le cadre du diagnostic et de la thérapie du cancer ovarien. Les cibles sélectionnées dans ce contexte sont les interleukines humaines IL-6 et IL-8 dans le but d'inhiber leurs effets angiogéniques, et le biomarqueur du cancer épithélial ovarien Mucine16 sous sa forme sécrétée (CA 125) et membranaire (Mucine16) dans le but de faire du diagnostic sanguin et cellulaire. Sélections IL-6 et IL-8 : Des séquences ont été sélectionnées par Filter-Binding SELEX. Sélection Mucine16 : Les cellules cancéreuses ovariennes présentent pour la plupart la particularité de surexprimer les deux formes de cette protéine. Ce qui en fait le candidat pour le ciblage des tumeurs. Des séquences ont été identifiées après 20 cycles de Cell-SELEX. D'autre part, nous avons comparé le marquage fluorescent de sphéroïdes MCF-7 par un anticorps anti-Mucine1 et un aptamère anti-Mucine1. L'aptamère montre une pénétration plus profonde dans le sphéroïde ainsi qu'une internalisation.

Titre traduit

DNA aptamers : from Cell-SELEX to imaging
Résumé

DNA Aptamers are single-stranded sequences able to specifically bind a target molecule. They constitute new tools for the detection and/or the inhibition of biological molecules. This work is in the field of ovarian cancer diagnostic and therapy. In this concept, selected targets are the human interleukins IL-6 and IL-8 for inhibiting their angiogenic effect and the epithelial ovarian cancer biomarker Mucine16 on its secreted (CA 125) and membranal (Mucine16) forms in the aim of doing blood and cellular diagnostic. IL-6 and IL-8 selections: Sequences have been selected by Filter-Binding SELEX. Mucine16 selection: Most of ovarian cancer cells overexpress the two forms of this protein. That is why Mucine16 is a candidate for tumor targeting. Sequences have been identified after 20 cycles of Cell-SELEX. In addition, we compared the fluorescent labeling of MCF-7 spheroids by an anti-Mucine1 antibody and its DNA aptamer analog. The aptamer exhibits a deeper spheroid penetration and is internalized.