Thèse soutenue

Une nouvelle approche pour étudier le mécanisme des glycosyltransférases
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Auteur / Autrice : Gaëlle Batot
Direction : Antoine RoyantChristelle Breton
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie structurale et nanobiologie
Date : Soutenance le 11/12/2013
Etablissement(s) : Grenoble
Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale chimie et science du vivant (Grenoble ; 199.-....)
Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : European synchrotron radiation facility (Grenoble, Isère, France ; 1988-....)
Jury : Président / Présidente : Franck Fieschi
Examinateurs / Examinatrices : Monica Palcic
Rapporteurs / Rapporteuses : Sylvie Fournel-Gigleux, Mirjam Czjzek

Mots clés

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Mots clés contrôlés

Résumé

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Les glycosyltransferases sont les enzymes responsables de la synthèse d'oligosaccharides, de polysaccharides et de glycoconjugués. Elles catalysent le transfert d'un saccharide à partir d'un substrat donneur, en général un nucléotide sucre, vers un substrat accepteur. Le mécanisme de réaction des glycosyltransférases peut avoir lieu avec une inversion ou une rétention de l'anomérie de liaison du sucre transféré. De nombreuses incertitudes subsistent au sujet du mécanisme des glycosyltransférases transférant avec rétention de l'anomérie. L'élucidation de ce mécanisme aiderait à la conception d'inhibiteurs ciblés afin de soigner des maladies allant des infections virales et bactériennes au cancer. De nombreuses protéines sont actives à l'état cristallin, ce qui fait de la cristallographie aus rayons X un outil de choix pour étudier le mécanisme d'enzymes. La « cristallographie cinétique » est un terme qui regroupe l'ensemble des techniques permettant d'initier une activité biologique in crystallo pour générer et piéger une quantité significative d'un état intermédiaire de réaction, afin de résoudre sa structure par cristallogrpahie aux rayons X. Le but de mon projet était d'étudier le mécanisme catalytique d'une glycosyltransférase transférant avec rétention de l'anomérie, par cristallographie cinétique. De cette façon, j'ai étudié une enzyme du groupe sanguin responsable du transfert d'un galactose à partir d'UDP-Gal vers l'antigène H. J'ai étudié les effets de la cryoprotection sur la structure de la protéine, et j'ai effectué les études préalables nécessaires à l'application de deux techniques issues de la cristallographie cinétique à l'étude de ces enzymes : « Déclencher-tremper »et « Tremper-déclencher ».