Thèse soutenue

Criblage phénotypique d'une banque d'ARN interférents par microscopie haut-débit haut-contenu d'informations appliqué à l'identification de facteurs cellulaires impliqués dans la colonisation du pneumocyte par Mycobacterium tuberculosis
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Auteur / Autrice : Ok-Ryul Song
Direction : Laurent Marsollier
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie cellulaire
Date : Soutenance en 2012
Etablissement(s) : Angers

Mots clés

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Mots clés contrôlés

Résumé

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La psychopathologie de la tuberculose associée à l'épidémie de SIDA et l'apparition de bacilles multi - résistants et extrêmement - résistants conduisent à des situations d’échecs thérapeutiques. Une meilleure compréhension des mécanismes moléculaires et cellulaires impliqués dans le processus de colonisation de l'organisme hôte par Mycobacteriun tuberculosis est nécessaire pour permettre des progrès radicaux en matière de lutte contre la tuberculose. M. Tuberculosis a la capacité de coloniser différents types de cellules pulmonaires constituant ainsi des véritables réservoirs du bacille. Si la contribution du bacille intramacrophagique dans la pathogenèse est bien établie, en revanche, le processus de colonisation des cellules épithéliales par M. Tuberculosis par microscopie haut débit haut contenu et l'avons appliqué au calibrage de 20 000 ARN interférents. Nous avons ainsi identifié 88 gènes candidats impliqués dans la réplication du bac. ARFGAP1 est un régulateur négatif de l'activation d'ARF1 qui est impliqué dans les système de trafic vésiculaire COPI et les voies de signalisation par la phospholipase D. L'ensemble de nos résultats ouvrent de nouvelles perspectives de recherche dans la signalisation intercellulaire de M. Tuberculosis. The current TB lengthy antibiotic therapy fails to be effective against multidrug and extremly resistant strains. To this end, improved understanding of the fundamental biology of this complex disease is needed to come up with radical advances in TB control. Pathology is intimately linked to the interplay between the host immune response and the persistence of the mycobacterium. In the lungs -the major affected organ- M. Tuberculosis has a preferential tropism for alveolar macrophages, dendritic cells and type II alveolar pneumocytes. Whereas the colonization of macrophages by M. Tuberculosis has been comprehensively studied, much less is knowm abaout that of lungs epithelial cells in which the bacillus penetrates but hardly replicates. To uncover key cellular genes involved in the invasion of M. Tuberculosis in pneumocytes, we undertook a genome wide RNAi screening on the M. Tuberculosis infected type II pneumocyte cell model A549. To do this we established a method relying on high content high troughput microscopy enabling the screening of a library of 20 000 RNAi and the selection and confirmation of the 88 RNAi hits. Among them, we carried out a more thorough study on ARFGAP1 for which silencing led to extensive bacterial internalization inside the epithelial cells followed by strong replication. We showed that in the context of out in vitro M. Tuberculosis model of infection, ARFGAP1 negatively regulates ARF1, which impacts on vesicular trafficking, signaling through phospholipase D and actin remodeling. Altogether, our results reveal novel host pathways that are involved in the succesful intracellular colonization of the tubercle becillus. S.