Approches cellulaires et moléculaires de deux vibrioses chez l'huître Crassostrea gigas et la palourde Ruditapes philippinarum
par Mohamed Houmed Aboubaker
Thèse de doctorat en Microbiologie
Sous la direction de Jean-Louis Nicolas et de Christine Paillard.
Soutenue en 2011
à Brest .
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Résumé
L'objectif de cette thèse était d’étudier et de comparer le comportement de deux vibrions pathogènes impliqués dans deux vibrioses, Vibrio aestuarianus chez l’huître, Crassostrea gigas et Vibrio tapetis chez la palourde, Ruditapes philippinarum. Pour cela, des souches des deux vibrions ont été transformées par un plasmide portant les gènes de la "Green Fluorescent Protein" et celui d’une résistance à un antibiotique. Cet outil a permis un suivi temporel chez des huîtres infectées par balnéation par deux souches de V. Aestuarianus GFP, l’une pathogène (02/041), l’autre (01/308) plus modérément pathogène et une souche de V. Tapetis-GFP. La vitesse de pénétration dans l’hémolymphe est souche-dépendante. La souche 02/041 s’est avérée particulièrement efficace pour entrer dans son hôte, suivie de la souche 01/308. Ils pouvaient être détectés dès une heure après leur distribution. V. Tapetis s’introduisait plus lentement mais se maintenant plus longtemps. L’étape suivante de l’infection étant la confrontation des vibrions aux défenses immunitaires des bivalves, les relations vibrions hémocytes ont été examinées précisément. A cette fin, une méthode utilisant des anticorps souche-spécifique a été développée. Contrairement aux billes de latex fluorescentes, cette méthode a permis de quantifier in vitro au cytométrie de flux, les nombres de V. Tapetis phagocytés et de ceux restant sur la membrane externe aussi bien avec des hémocyanines adhérents que décollés. La piste des exo polysaccharides (EPS) secrétés par les bactéries a été explorée pour savoir s’ils pouvaient favoriser ou empêcher la phagocytose. V. Tapetis produit des EPS en abondance, contrairement à V. A.
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Titre traduit
Cellular and molecular approaches of two vibriosis in Pacific oyster Crassostrea gigas and the Manila clam Ruditapes philippinarum
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Résumé
The aim of this thesis was the study and the comparison of the behavior of two pathogenic bacteria in their respective hosts: Vibrio aestuarianus in the Pacific oyster, Crassostrea gigas, and Vibrio tapetis in the Manila clam, Ruditapes philippinarum. Therefore, the bacteria were transformed with a plasmid coding for the Green Fluorescent Protein » and harbouring an antibiotic resistance cassette. This tool permitted to follow the penetration in the oyster over time when the animal was exposed to two strains of V. Aestuarianus-GFP, the pathogenic 02/041 and the moderate pathogen, 01/308, as well as to V. Tapetis-GFP. The strain 02/041 was found t penetrate very efficiently the hemolymph quickly followed by the 01/308 strain while the V. Tapetis infiltrated much slower but remained longer in the tissues. The next step was the study of their relationship with the host’s hemocytes. Therefore, the phagocytosis of V. Tapetis by different hemocytes was studied, and a new phagocytosis quantification method using a V. Tapetis-specific antibody was developed. In contrast to the fluoresce beads which are generally used for measuring phagocytosis, this method allowed precise quantification of the bacteria attached to exterior membrane and of those present inside the hemocytes, hemocytes that were either attached to the glass slide or detached. Exopolysaccharids (EPS) secreted by the bacteria were tested to verify whether they could favor or prevent phagocytosis. V. Tapetis produced large quantity of EPS in contrast to V. Aestuarianus, where especially the virulent strains produce only very little. 1-lowever it is difficult to link the abundance and composition of the EPS wit.
