Mise au point d'un modèle d'étude de la maladie vasculaire du greffon

An expérimental models to study allograft vasculopathy

• Auteur / Autrice : Bertrand Marcheix
• Direction : Robert Salvayre, Mogens Thomsen
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Physiopathologie
• Date : Soutenance en 2010
• Etablissement(s) : Toulouse 3

Mots clés

Mots clés contrôlés

Mésentère

Réaction du greffon contre l'hôte

Greffes vasculaires

Mots clés libres

Maladie vasculaire du greffon

Rejet chronique

Artère mésentérique

Transplantation

Greffe

Résumé

Situation du sujet : En dépit des progrès réalisés en matière d'immunosuppression, la maladie vasculaire chronique (MVC) reste la première cause de perte du greffon après un an. Les modèles expérimentaux apparaissent indispensables pour une meilleure compréhension des mécanismes impliqués. Les modèles classiques sont limités par des difficultés de transposition des résultats à des situations cliniques chez l'homme. Objectif : Le but de ce travail était de développer un modèle d'étude original de la MVC. Il s'agissait de reconstituer de façon reproductible un conflit allogénique humain in vivo, chez des souris immunodéficientes. La mise au point de ce modèle supposait la réalisation de 4 étapes intermédiaires : 1. La mise en place d'un protocole de prélèvement à fins scientifiques chez les donneurs d'organes. 2. Le développement d'une technique assurant une humanisation reproductible de souris immuno- déficientes. 3. La mise au point d'une technique chirurgicale de greffe du segment artériel mésentérique humain chez la souris. 4. La mise en évidence de lésions de RVC dans le groupe de souris greffées humanisées en combinaison allogénique et l'absence de lésions dans le groupe contrôle isogénique. Matériels et méthodes : Un protocole de prélèvement de tissus humains chez les donneurs d'organes a été mis en place, à l'échelle régionale après avis favorables de l'Etablissement Français des Greffes et du Comité d'Ethique du CHU de Toulouse. Des souris SCID/Beige déficientes pour l'immunité T, B et NK ont été utilisées après vérification de l'absence d'immunité résiduelle (caractère " leaky "). Une première partie de ce travail a consisté à la mise au point du protocole d'humanisation : Des souris ont été réparties en 5 groupes recevant 5 à 100 millions de splénocytes humains et en 2 groupes recevant 5 ou 10 millions de cellules médullaires. Un prélèvement sanguin hebdomadaire permettait un typage des cellules humaines circulantes par cytométrie en flux, et dosage des IgG humaines par technique ELISA. Après sacrifice, les organes lymphoïdes étaient examinés en immunohistochimie et en cytométrie en flux à la recherche de cellules humaines. Dans une deuxième partie du travail, des souris SCID/Beige (non " leaky ") ont subi la greffe d'un segment d'artère mésentérique humaine issue de donneurs d'organes. Cinq à huit greffes ont été réalisées dans les 48 heures suivant chaque prélèvement multi organes. . .

Background : In spite of progress in the field of immunosuppressive treatment, the allograft vasculopathy remains the first cause of graft loss after one year. The expérimental models appear essential for a better understanding of the implied mechanisms The traditional models are limited because of difficulties of transposition of the results to clinical situations in human. Goals : The goal of this work was to develop an original model to study AV consisting of the in vivo reconstitution in immunodeficient mice of human allogeneix conflicts. To achieve this goal, four intermediate stages were necessary : 1. The harvesting of human tissues in human cadaveric organ donors 2. The reconstitution of complete and functional human immune system in immunodeficient mice 3. The graft of human arterial grafts in mice 4. The reconstitution of expérimental groups (control, isogeneic, allogeneic) to valid the expérimental model of AV in allogeneic group and absence of AV in the control and isogeneic groups. Methods : The harvesting of human tissues in human cadaveric organ donors was organized in the whole Midi Pyrénées area after authorization of the ethic commitee of our insitution and of the French Transplantation Agency. Pièces of mesentery and segment of spleen were removed from the cadaveric organ donors. Defective SCID/Beige mice for immunity T, B and NK were used qfter checking of the absence of residual immunity (" leakiness "). A first part of this work focused on the reconsituttion of the human immune system in SCID/Beige mice : Mice were divided into 5 groups receiveing from 5 to 100 human illion splenocytes and into 2 groups receiving 5 to 10 million medullary cells. A weekly blood sample allowed typing of the circulating human cells (flow cytometry) and détection of human IgG (ELISA). After sacrifice, the lymphoid bodies were examined in immunohistochimy and flow cytometry. The second part of this work focused on the study of AV. SCID/Beige mice received infra rénal transplantation of segments of terminal collatéral of human mesenteric arteru using the " sleeve " anastomosis technique. Five to eight transplantation were carried out af in the 48 hours following each multi-organ harvesting. The transplantation was associated with an isogeneic immune reconstitution in 6 mice, while 12 mice underwent allogeneic reconstitution. . .