Thèse soutenue

Interaction de Pseudomonas fluorescens avec l'épithélium intestinal : Rôle dans l'inflammation et la perméabilité intestinale et implication potentielle dans la maladie de Crohn
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Auteur / Autrice : Amar Madi
Direction : Marc FeuilloleyNathalie Connil
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie. Microbiologie
Date : Soutenance en 2010
Etablissement(s) : Rouen

Résumé

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L'objectif de ma thèse était de caractériser l'interaction de Pseudomonas fluorescens avec les cellules épithéliales de l'intestin. En effet, des anticorps anti I2, un antigène appartenant à cette bactérie, ont été retrouvés dans le sérum de patients atteints de maladie de Crohn, suggérant l'implication potentielle de P. Fluorescens dans cette maladie. Ainsi, nous avons souhaité étudier la virulence de cette bactérie envers les cellules épithéliales de l'intestin, sur les modèles cellulaires Caco-2/TC7 et HT-29. Dans un premier temps, nous avons étudié et comparé les effets cytotoxiques et proinflammatoires de la souche clinique P. Fluorescens MFN1032 avec ceux d'une souche psychrotrophe de référence P. Fluorescens MF37 et un pathogène opportuniste reconnu, Pseudomonas aeruginosa PAO1. Nous avons pu montrer que bien qu'inférieur à la cytotoxicité induite par P. Aeruginosa PAO1, la souche clinique P. Fluorescens MFN1032 est capable d'exercer un effet cytotoxique élevé sur les cellules Caco-2/TC7 et HT-29. La cytotoxicité de P. Fluorescens MF37 reste au contraire relativement faible. De plus, les deux souches de P. Fluorescens, tout comme P. Aeruginosa PAO1, induisent la sécrétion de la cytokine proinflammatoire IL-8. Cette induction est dépendante de la voie AP-1 pour les deux souches P. Fluorescens tandis que pour P. Aeruginosa PAO1, c'est la voie NF-kB qui est impliquée dans la sécrétion d'IL-8. Par la suite, nous nous sommes intérssés à l'étude de l'effet de ces bactéries sur la perméabilité intestinale en utilisant des cellules Caco-2/TC7 sous forme différenciée. Les résultats montrent que les deux souches de P. Fluorescens provoquent une augmentation de la perméabilité paracellulaire, associée à des réarrangements du cytosquelette d'actine F et une modification de l'expression des jonctions serrées. Nous avons pu montrer également dans cette étude, que lors de l'infection, les bactéries testées sont capables de transloquer du coté apical de la monocouche de cellules Caco-2/TC7 vers le milieu basolatéral en utilisant plus probablement la voie transcellulaire que paracellulaire. Enfin, nous avons étudié l'effet de la b-défensine-2, un peptide antimicrobien présent au niveau intestinal, sur la virulence de P. Fluorescens. Nos résultats montrent qu'une bactérie considérée généralement comme inoffensive telle que P. Fluorescens MF37, originairement isolée du lait, voit sa virulence envers les Caco-2/TC7 fortement augmentée losqu'elle est pré-traitée avec ce peptide. L'ensemble de ce travail démontre pour la première fois que P. Fluorescens est capable de se comporter comme un véritable pathogène opportuniste et pourrait ainsi participer à l'étiologie des phénomènes inflammatoires tels que ceux rencontrés chez les patients atteints de maladie de Crohn. Une plus grande importance devrait donc lui être accordée dans le futur afin de pouvoir identifier plus précisément son mode de virulence et son rôle éventuel dans les pathologies humaines.