Analyse de mutants de RNAi chez Arabidopsis thaliana
par Vincent Jauvion
Thèse de doctorat en Vie et Santé
Sous la direction de Hervé Vaucheret.
Soutenue en 2010
à Paris 6 .
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Titre traduit
Analyses of RNAi mutants in Arabidopsis thaliana
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Résumé
La découverte des phénomènes de RNA silencing (RNAi) lors d’expériences de transgénèse a mené à l’émergence de recherches sur les petits ARN (sRNA). L’identification des acteurs majeurs des voies de RNAi par l’étude de lignées transgéniques inactivées au niveau transcriptionnel (TGS) ou post-trancriptionnel (PTGS) a permis la compréhension des mécanismes généraux. Ainsi le RNAi est initié par un ARN double brin, clivé par une RNase de type DICER en sARN de 21- à 24-nt. Ces sARN sont chargés par des protéines ARGONAUTE pour guider la méthylation de l’ADN (TGS), catalyser le clivage de l’ARN ou inhiber sa traduction (PTGS). Les mutagénèses des lignées L1 (p35S::GUS) et 2a3 (p35S::NIA2) ont permis d’isoler 81 mutants déficients en PTGS, dont 49 sont affectés dans les gènes SGS2/RDR6 (ARN polymérase ARN dépendante), SGS3 (protéine fixant l’ARN), SGS4/AGO1 (enzyme clivant l’ARN), SGS5/HEN1 (sARN méthyltransférase) ou SGS6/MET1 (ADN méthyltransférase). Le travail présenté ici a consisté à caractériser les 32 mutants restants et à identifier de nouveaux acteurs du PTGS. L’analyse de sgs7/sde5 a montré que ce facteur putatif de transport des ARN est un acteur essentiel du PTGS. L’analyse de sgs9/hpr1 a révélé l’implication du complexe THO/TREX d’export des ARN dans le PTGS. L’analyse de sgs8/jmj14 a impliqué l’histone H3K4 me3 déméthylase dans le PTGS. Enfin, l’analyse de sgs9/sde3, sgs15/prp39 et sgs14 a montré qu’une ARN hélicase (SDE3), un facteur de maturation des ARN (PRP39) et une protéine à identifier (SGS14) ne sont requis que pour les lignées déclenchant peu le PTGS. De plus, des approches de génétique inverse ont révélé les liens et différences entre les voies de PTGS
