Mise au point de deux stratégies analytiques de (dépistage rapide et confirmation) pour la détection du Synacthène dans le plasma dans le cadre du contrôle anti-dopage

par Ayman Chaabo

Thèse de doctorat en Biochimie analytique. Dopage

Sous la direction de Jean-Claude Tabet.

Soutenue en 2010

à Paris 6 .

mots clés

• Tétracosactide
• Dopage dans les sports
• Dépistage

Résumé

Le Synacthène® (tétracosactide) est un médicament de synthèse correspondant aux 24 premiers acides aminés de l’hormone hypophysaire adrenocorticotropine (ACTH), et présentant la même activité biologique en stimulant la synthèse par le cortex surrénal de différents stéroïdes (Glucocorticoïdes, minéralo-corticoïdes et androgènes). La prise de ce médicament est interdite en et hors compétition par l’agence mondiale anti-dopage. Dans ce travail, trois stratégies analytiques ont été explorées pour détecter spécifiquement le Synacthène. La première stratégie a reposé sur une électrophorèse permettant de séparer le Synacthène et l’ACTH suivie d’immunoblot. Deux systèmes ont été testés : électrophorèse à pH 6,5 et isoélectrofocalisation en gradient de pH 2-11. Une sensibilité de l’ordre du pg/mL a été atteinte La deuxième stratégie a utilisé un immunodosage reconnaissant la partie commune des molécules d’ACTH et de Synacthène (fragment 1-24) après élimination totale de l’ACTH par extraction sur phase solide. Cette méthode est envisagée comme une méthode de dépisatge rapide lors de contrôle anti-dopage. La troisième stratégie Une méthode a reposé sur l’analyse par LC/MS/MS en mode SRM. Cette méthode n’exige pas l’élimination de l’ACTH puisque ce composé est identifié sans ambiguïté. La sensibilité atteinte a été de 8 pg/mL (concentration initiale dans 1 mL de plasma analysé) et la limite de quantification de 15 pg/mL. Cette méthode peut être envisagée comme méthode de confirmation. Les deux stratégies envisagées pour le screening et la confirmation ont été testées sur certains des échantillons de plasma prélevés lors d’une étude d’excrétion chez de 9 sujets.

Titre traduit

Development of two analytical strategies (screening and confirmation) for the detection of Synacthen in plasma in anti-doping control

Pas de résumé disponible.

Résumé

Synacthen is a drug which corresponds to 24 first amino acid of adrenocorticotropic hormone (ACTH), and presents the same biological activity by stimulation of adrenal cortex and the syntheses of different steroids hormone (Glucocorticoïdes, mineralocorticoides and androgens). The taken of this drug is prohibited in and out of competition by the World Anti Doping Agency (WADA). In this work, three different analytical strategies were engaged for Synacthen detection in plasma. Electrophoreses and iso-electrofocalisation techniques were used in the first one, and a high sensitivity in the order of 1 pg/mL was obtained. The immunoassay was used in the second one, After ACTH elimination from plasma by the use of solid phase extraction cartridge, the Synacthen is specifically detected by the use of this kit of immunoassay. This method may be used as a screening method because of the high sensitivity less or more of 10 pg/mL. The LC/MS/MS analysis was used in the third one, selected reaction monitoring mode was used and the method was validated with a high sensitivity of 8 pg/mL. The limit of quantification of the method was 15 pg/mL. This method may be used as a confirmation method. The two explored methods were tested on 9 subjects who were administrated with two forms of Synacthen. Concentrations between 16 and 310 pg/mL were observed.