Bioconjugaison de la fibronectine à des sondes exogènes : du fluorophore organique à la nanoparticule hybride

par Céline Hoffmann

Thèse de doctorat en Sciences de la vie et de la santé

Sous la direction de Emmanuel Pauthe et de Fabrice Goubard.

Soutenue en 2010

à Cergy-Pontoise , dans le cadre de École doctorale Sciences et ingénierie (Cergy-Pontoise, Val d'Oise) .

mots clés

• Bioconjugaison
• Oxydes de lanthanides
• Fibronectines
• Matrice extracellulaire
• Polyéthylèneglycol
• Conformation des protéines

Résumé

La fibronectine (Fn) est une protéine structurante de la matrice extracellulaire (MEC) et est impliquée dans de nombreux comportements cellulaires. Le suivi du devenir d’une protéine de la MEC telle que la Fn n’est possible que par l’intermédiaire de sondes détectables par imagerie. L’objectif de ce travail de thèse est de conjuguer la Fn à différentes sondes exogènes : un fluorophore organique et deux types de nanoparticules hybrides. L’étude ce concentre sur l’impact de la bioconjugaison sur la structure et les fonctionnalités biologiques de la Fn. L’ensemble de ce travail met en évidence l’importance du contrôle des conditions de bioconjugaison (stœchiométrie de greffage, pH, solvant). L’obtention d’un complexe Fn-FITC fonctionnel rend possible le suivi au cours du temps du remodelage de la Fn simultanément à la migration cellulaire. L’élaboration d’un complexe Fn/nanoparticule de conformation globale correcte met en évidence des interactions spécifiques Fn/ cellules.

Titre traduit

Fn bioconjugation to exogenic dyes : from organic fluorophore to hybrid nanoparticles

Résumé

Fibronectin (Fn) is a structural protein of extracellular matrix (ECM) and is implicated into many cellular behavior (adhesion, migration…). Follow the becoming of an ECM protein as Fn is possible only via imaging dyes. The aim of this PhD work is to conjugate Fn to different exogenic dyes : organic fluorophore (and two sorts of double detection hybrid nanoparticles. The study focuses on bioconjugation impact onto Fn structure and biological functionalities. This work put in evidence the importance of controlling bioconjugation conditions particularly bioconjugation stœchiometry, pH value and solvent condition. Getting functional Fn-FITC complex make possible the following of Fn matrix remodeling simultaneously of cellular migration. The Fn/nanoparticles conjugate presents a correct global conformation and specific interaction with cells.