Etude pharmacologique expérimentale de l'activité antipaludique d'un composé de synthèse : le chlorure de methylthioninium

par Giovanny Garavito

Thèse de doctorat en Innovation pharmacologique

Sous la direction de Éric Deharo.

Soutenue en 2007

à Toulouse 3 .

mots clés

• Paludisme
• Antipaludiques
• Pharmacologie
• Plasmodium
• Bleu de méthylène
• Chimiosensibilité
• Interactions de drogues
• Stade sensible
• Glutathion
• Hème
• Malaria
• Antimalarials
• Pharmacology
• Plasmodium
• Methylene blue
• Chimiosensitivity
• Drugs Interaction
• Sensitive stages
• Glutathione
• Heme
• Antipaludiques
• Médicaments -- Effets secondaires
• Interactions médicamenteuses
• Plasmodium falciparum
• Hème
• Glutathion

Résumé

Nous nous sommes intéressés à l'activité antipaludique du bleu de méthylène (BM), qui fut la première molécule de synthèse utilisée dans le traitement des accès palustres. Nous avons montré que le BM est actif sur des souches cultivées de Plasmodium falciparum d'origines géographiques et de chloroquino-sensibilités différentes (CI50<10nM). Il est aussi actif sur le cycle sanguin de Plasmodium murin (DE50<15mg/Kg), mais pas sur la phase hépatique. Les stades érythrocytaires les plus sensibles sont les stades jeunes. Les associations avec les traitements classiques sont de type : antagoniste avec amodiaquine ; antagonisme-additif avec atovaquone, doxycycline, pyrimethamine ; additive-pas d'interaction avec artemether, chloroquine, mefloquine, primaquine et synergique avec la quinine. Nous avons montré par spectrométrie UV, CCM et spectrométrie de masse, qu'il n'y a pas de liaison entre le BM et l'hème. Nous avons également mis au point une nouvelle technique pour mesurer la transformation de l'hème par le glutathion et mesurer ainsi l'activité des drogues sur cette transformation.

Titre traduit

Pharmacological study of the antimalarial activity of a synthetic compound : the methylthioninum chloride

Résumé

Methylene blue (MB) was the first synthetic molecule used in the malaria treatment. The evaluation of the antimalarial activity of this compound was the aim of this study. It has been shown that MB selectively inhibited the in vitro growth of chloroquine-sensitive and chloroquine-resistant P. Falciparum strains (IC50<10 nM). MB was effective on young erythrocytic stage. MB was also effective during in vivo tests on mice infected by several Plasmodium murine strains (ED50 <15 mg/kg). No activity on the hepatic stage was observed. The study of the combination of MB with classic antimalarial compounds was assessed. We observed an antagonistic effect with amodiaquine and an antagonistic-additive effect with atovaquone, doxycyclin and pyrimethamin. An additive-no interaction effect with artemether, chloroquine, mefloquine, primaquine was observed. The only synergistic interaction was obtained with quinine. No complexation between MB and heme was observed by UV spectroscopy, thin layer chromatography or mass spectrometry. During this work, we also proposed an in vitro microassay to test the ability of drugs to inhibit heme-glutathione dependent degradation.