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des thèses françaises
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Etude de trois transporteurs de monosaccharides impliqués dans le developpement de la baie de raisin (vitis vinefera L. ) : identification, caractérisation, localisation et régulation
| Auteur / Autrice : | Céline Vignault |
| Direction : | Serge Delrot, Rémi Lemoine |
| Type : | Thèse de doctorat |
| Discipline(s) : | Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie |
| Date : | Soutenance en 2007 |
| Etablissement(s) : | Poitiers |
| Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale Ingénierie chimique, biologique et géologique (Poitiers ; 2000-2008) |
| Partenaire(s) de recherche : | autre partenaire : Université de Poitiers. UFR des sciences fondamentales et appliquées |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Résumé
La Vigne est principalement cultivée pour ses baies de raisin, qui ont un intérêt économique considérable. Afin de mieux comprendre les mécanismes impliqués dans l’accumulation des sucres, nous avons identifié trois transporteurs de monosaccharides : VvHT1 (Vitis vinifera hexose transporter 1), VvHT2 et VvHT6. VvHT1 a été caractérisé dans le système hétérologue levure comme un transporteur de glucose membranaire. En conjuguant des techniques d’hybridation in situ et d’immunolocalisation nous avons pu localiser VvHT1 à l’interface du complexe cellule criblée/cellule compagne. Les tentatives de caractérisation fonctionnelle de VvHT2 et VvHT6 dans la levure ayant échoué, nous avons opté pour de la transgenèse. Ainsi des expériences d’expression transitoire dans les protoplastes de plantes ont permis de localiser VvHT2-GFP et VvHT6-GFP sur le tonoplaste. Afin de caractériser VvHT2 et VvHT6, des mesures d’absorption de sucres radiomarqués réalisées sur des cellules transgéniques de Vigne surexprimant VvHT2 révèlent un efflux de glucose par rapport au contrôle, et celles surexprimant VvHT6 révèlent un influx de glucose plus important comparativement au contrôle. Dans le but de mieux comprendre la régulation de ces transporteurs au cours du développement de la baie, nous avons cloné et analysé leurs promoteurs. Des expériences de RT-PCR semi-quantitative réalisées après traitements de cellules de Vigne par différents stimuli ont révélé que certains des éléments identifiés par analyse in silico sur les promoteurs pourraient être fonctionnels. Enfin, des constructions promoteursVvHT::GUS ont été préparées et utilisées pour localiser l’expression de VvHT2 et VvHT6 in planta.