L' Analyse des fonctions de STAT5a /STAT5b dans les progéniteurs hématopoïétiques humains

Analysis of STATSa and STATSb fonctions on human hematopoietic progenitor cells

• Auteur / Autrice : Sylvie Augé
• Direction : Isabelle Dusanter-Fourt
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Bases fondamentales de l'oncogénèse
• Date : Soutenance en 2007
• Etablissement(s) : Paris 7

Mots clés

Mots clés contrôlés

Cytokines

Régulation de l'expression des gènes

Produits du gène nef

Facteur de transcription STAT-5

Résumé

Les progéniteurs hématopoïétiques humains, à l'origine de l'ensemble des cellules du sang, sont sous le contrôle de facteurs extrinsèques pour ajuster leur niveau d'auto-renouvellement et leur différenciation. Trois cytokines: la thrombopoïétine (Tpo), le stem cell facteur (SCF) et le ligand de la tyrosine kinase du foie fœtal (FL) semblent essentielles. Ces facteurs mettent en jeu diverses voies de signalisation intracellulaires, parmi lesquelles la voie jak/Stat et les facteurs StatSa et StatSb chez la Souris. J'ai analysé si les trois cytokines régulaient l'activité des facteurs StatS par le biais de modifications post-traductionnelles et montré que seule la TPO induit une phosphorylation sur Tyr694 alors que les trois cytokines induisent la phosphorylation sur Ser780. J'ai cherché à identifier, sans succès actuels, les partenaires de StatSa en présence des 3 cytokines, par purification préparative et spectrométrie de masse. J'ai enfin cherché à identifier les rôles possibles de StatSa/StatSb dans le devenir des progéniteurs humains par introduction lentivirale de shRNA sélectifs. Ceci a permis de révéler l'action différentielle de StatSa et StatSb sur le maintien de progéniteurs multipotents humains. Un travail collaboratif a confirmé la fonction essentielle de Stat5a/b dans le maintien des progéniteurs de primates et révélé l'existence d'une régulation de l'expression même de ces facteurs par un membre de la classe des récepteurs nucléaires, PPAR-gamma.

Human hematopoietic progenitor cells are responsible for the expression of all blood cells and are under the control of extrinsic factors to regulate their self-renewal and their differentiation. These factors activate various signaling pathway, among which JAK-STAT pathway, and STATSa and STATSb, which are known as crucial for maintenance and differentiation of murine hematopoietic progenitor cells. Three cytokines: thrombopoïetin (Tpo), stem cell factor (SCF) and ligand of tyrosin kinase of the fetal liver (FL) are important extrinsic regulators. I analyzed how STAT5a/b mediate actions from these three cytokines, by searching for proteic partners or analysing differential post-translational modifications of STATSa /b in the presence of these cytokines. My experiments indicated that only Tpo induced canonical tyrosine phosphorylation of STAT5 but SCF and FL allowed a serine phosphorylation of STAT5. The search for partners of STATSa by purification based on streptavidine-biotine affinity did not lead to any reproducible data. However, to decipher the role of STATa/b in human progenitors, I selectively inhibited the expression of each STATS factors in sorted CD34+ hematopoietic progenitors, through the use of highly specific shRNA encoding lentiviral vectors. My work showed a differential role of STATSa and STATSb on cellular survival/proliferation and a redundant role on erythroid differentiation. Furthermore, a collaborative work confirmed the essential function of STAT5a/b on primates hematopoietic progenitors and revealed the existence of a regulatory function of the nuclear receptor PPAR-gamma on STAT5a/b expression