Etude biochimique, structurale et physiopathologique de la lipase pancréatique humaine apparentée de type 2
par Cécilia Eydoux
Thèse de doctorat en Nutrition et sécurité alimentaire
Sous la direction de Alain De Caro.
Soutenue en 2007
à Aix-Marseille 2 , en partenariat avec Université d'Aix-Marseille II. Faculté de médecine (1970-2011) (autre partenaire) .
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Résumé
Le pancréas humain synthétise trois ARNms différents codant pour la lipase pancréatique classique (HPL), la lipase pancréatique apparentée de type 1 (HPLRP1) et la lipase pancréatique apparentée de type 2 (HPLRP2). Ces lipases présentent une identité de séquence en acides aminés élevée (65-68%) et une organisation structurale identique ; mais leurs propriétés cinétiques sont différentes sur des substrats tels que les triglycérides, les phospholipides et les galactolipides. Un ELISA a été mis au point en utilisant des anticorps anti-peptides spécifiques de la HPLRP2 afin de quantifier la protéine dans le suc pancréatique d’individus sains ou atteints de pancréatite chronique calcifiante. Ces anticorps anti-peptides ont également été utilisés pour l’immuno-cytolocalisation de cette lipase le long du tractus digestif. La HPLRP2 est détectée dans les cellules principales de l’estomac, les cellules acineuses du pancréas et les cellules de Paneth intestinales, suggérant divers rôles : digestif et antimicrobien. La HPLRP2 recombinante a été produite à partir d’une souche déficiente en protéase A dans la levure Pichia pastoris. La lipase purifiée présente une masse moléculaire de 50 kDa et certaines de ces propriétés biochimiques ont été déterminées. Elle semble jouer le rôle de galactolipase dans la digestion des galactolipides in vivo. La présence des PLRP2 a été recherchée dans l’équipement enzymatique du pancréas de diverses espèces présentant des régimes alimentaires différents. L’obtention de la HPLRP2 non glycosylée par mutagenèse dirigée, a permis de cristalliser l’enzyme et de déterminer sa structure 3-D à une résolution de 2,8 Å dans la conformation ouverte en absence d’inhibiteur ou d’analogue de substrat.
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Titre traduit
Biochemical, structural and physiopathological study of the human pancreatic lipase related protein 2
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Résumé
Human pancreas synthesizes 3 different mRNAs encoding classical human pancreatic lipase (HPL), human pancreatic lipase related protein 1 (HPLRP1) and human pancreatic lipase related protein 2 (HPLRP2). These lipases show a high degree of amino acid sequence identity (65-68%) and a similar pattern of structural organization, but different kinetic properties on substrates such as triglycerides, phospholipids and galactolipids. An ELISA was performed, using specific HPLRP2 anti-peptide antibodies, to quantify the protein in the pancreatic juice of both normal patients and patients suffering from chronic calcifying pancreatitis. These anti-peptide antibodies were also used for the immuno-cytolocalization of HPLRP2 along the digestive tract. HPLRP2 was found to be present in the chief cells of the stomach, in the acinar cells of the pancreas and in the intestinal Paneth cells, which suggests that HPLRP2 plays different role: digestive and antimicrobial. Recombinant HPLRP2 was produced in a protease A deficient strain of the yeast Pichia pastoris. The purified lipase has a molecular mass of 50 kDa and some of its biochemical properties have been determined. HPLRP2 seems play the role of a galactolipase in the digestion of galactolipids in vivo. The presence of PLRP2 has been purchased in the enzymatic equipment of the pancreas of various species with different diets. The non-glycosylated HPLRP2, obtained by performing directed mutagenesis, was crystallized and its 3-D-structure was determined at a resolution of 2. 8 Å in the open conformation without any inhibitors or substrate analogues.
