Thèse soutenue

Déterminants moléculaires de la spécificité d'espèce portés par le complexe polymérase des virus grippaux de type A
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Auteur / Autrice : Emmanuel José Dos Santos Afonso
Direction : Brigitte Gicquel
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Microbiologie
Date : Soutenance en 2006
Etablissement(s) : Paris 7

Mots clés

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Mots clés libres

Résumé

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En règle générale les virus grippaux aviaires ne se multiplient pas chez l'homme. Cependant, leur transmission et leur adaptation à l'homme peut donner lieu à des pandémies dévastatrices, comme en 1918. Nous avons observé que le défaut d'activité de complexes polymérases dérivés de virus aviaires dans des cellules de mammifères était déterminé principalement par la sous-unité PB2 du complexe, et lié à un défaut d'association avec la nucléoprotéine virale. Dans leur ensemble, les résultats obtenus suggèrent que la protéine PB2 pourrait jouer un rôle déterminant dans les phénomènes de restriction d'hôte de par sa position au coeur d'interactions moléculaires mettant en jeu à la fois la nucléoprotéine et un ou plusieurs facteurs cellulaires. Ces données nous ont incités à rechercher les interacteurs cellulaires du complexe polymérase, et en particulier ceux qui sont déterminants vis-à-vis du potentiel de multiplication des virus grippaux chez l'homme. Dans ce but, nous avons produit par génétique inverse un virus grippal exprimant une protéine PB2 fusionnée à l'étiquette de purification « One-STrEP-tag », ce qui nous a conduit à cartographier les signaux nécessaires à l'emballage du segment PB2. A partir d'extraits de cellules infectées, des protéines cellulaires ont été co-purifiées avec le complexe polymérase et sont en cours d'identification par spectrométrie de masse. En complément de cette approche biochimique, des interacteurs du complexe polymérase ont été recherchés par la méthode du double-hybride dans la levure. L'importance fonctionnelle des protéines identifiées par l'une ou l'autre des approches reste à évaluer dans le contexte du cycle de réplication virale.