Thèse soutenue

Etude de l'épissage du transcrit primaire du virus de l'immunodeficience humaine : interaction et mécanisme d'action des protéines SR et hnRNP au niveau du site accepteur A3
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Auteur / Autrice : Houda Hallay
Direction : Christiane Branlant
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie structurale, moléculaire et cellulaire
Date : Soutenance en 2006
Etablissement(s) : Nancy 1
Partenaire(s) de recherche : autre partenaire : Université Henri Poincaré Nancy 1. Faculté des sciences et techniques

Mots clés

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Résumé

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L’épissage de l’ARN du HIV-1 joue un rôle majeur pour sa multiplication. A partir de 4 sites donneurs et 8 sites accepteurs d’épissage plus de 30 ARNm viraux sont produits. Nous avons décortiqué les mécanismes régulant l’utilisation du site accepteur A3 nécessaire pour la production des ARNm tat. La protéine Tat est requise pour la production des ARN viraux. Comme elle est toxique pour la cellule infectée, sa production est fortement contrôlée au niveau de l’épissage. Deux éléments inhibant l’utilisation du site A3 avaient été identifiés, ESS2 fixe la protéine hnRNP A1 et ESS2p la hnRNP H. Nous avons montré qu’en se fixant sur ESS2p, hnRNP H inhibe le site A3 par encombrement stérique. En combinant des méthodes moléculaires et structurales, nous avons expliqué comment, en se liant sur l’élément ESS2 loin du site A3, hnRNP A1 limite l’activité de ce site. Les résultats montrent que la fixation coopérative et la multimérisation de plusieurs molécules de hnRNP A1 est initiée par la fixation simultanée d’au moins 2 molécules de hnRNP A1, dont l’une interagit avec l’élément ESS2 par son domaine RRM. Le domaine Gly de hnRNP A1 stabilise les complexes formés. Des mutations dans ESS2 limitent la fixation de hnRNP A1 sur toute la région ARN et augmentent l’épissage. Les protéines SRp40 et SC35 activent l’épissage au site A3 en entrant en compétition avec hnRNP A1 au niveau de l’élément ESS2. Nous avons aussi montré que des ARN viraux, issus d’isolats du HIV-1 ayant perdu la capacité de produire de nouveaux virions, contiennent 2 mutations dans la région régulant le site A3 qui augmentent la fixation de hnRNP A1 et bloquent l’épissage au site A3.