Les lésions des acides nucléiques : détection par CLHP-SM/SM dans les milieux biologiques humains et intérêt comme biomarqueurs du stress oxydant et de l'inflammation

par Carine Daum-Badouard

Thèse de doctorat en Biotechnologie, santé, management

Sous la direction de Jean-Luc Ravanat.

Soutenue en 2006

à l'Université Joseph Fourier (Grenoble ; 1971-2015) .

mots clés

• Marqueurs biologiques
• ADN
• ARN
• Inflammation
• Stress oxydatif

Résumé

L'ADN ou l'ARN, détenteurs de l'information génétique, peuvent subir des dommages dus aux acteurs du stress oxydant ou de l'inflammation. La cellule a développé des mécanismes de réparation de ces dommages, mais certaines lésions peuvent persister et devenir mutagènes. Dans ce but, nous nous sommes intéressés au dosage simultané de plusieurs de ces lésions à l'aide d'une technique de chromatographie liquide couplée à un spectromètre de masse en mode tandem outil analytique rapide et fiable ayant une très grande sensibilité. Le but de ce travail était de trouvel des biomarqueurs du stress oxydant ou de l'inflammation parmi les lésions connues de l'ADN et de les quantifier dans les milieux biologiques humains afin de compléter le panel existant de biomarqueurs protéiques ou lipidiques. Ainsi, trois groupes de lésions ont pu être quantifiés : les lésions oxydatives issues de l'action des espèces oxygénées activées, les lésions chlorées issues des phénomènes inflammatoires et les adduits de la peroxydation lipidique. Les étapes de mise au point analytique ayant été optimisées, elles ont été suivies d'une validation biologique parmi différentes pathologies étudiées et représentées par le diabète, certains cancers traités par radiothérapie et les hommes atteints d'infertilité masculine. Les différents résultats montrent une variation des taux des certaines lésions dans les leucocytes circulants ou des l'urine des patients par rapport aux sujets sains. Néanmoins, ces essais nécessitent d'être confirmés quant à l'utilisatiol des ces lésions en tant que biomarqueurs. D'autres types de pathologies devront également être testés.

Titre traduit

Nucleic acids lesions : detections by HPLC-MS/MS in human biological fluids and interest as biomarkers of oxidative stress inflammation

Pas de résumé disponible.

Résumé

Molecules involved in oxidative stress or inflammation can damage DNA or RNA, the biopolymers that contain the genetic information. The cel! has developed several enzymatic systems to repair the damage but sorne of them can remain and lead to mutagenecity. Hence, we focused our attention on the simultaneous quantification of severallesions using high performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry, a very sensitive, fast and reliable analytical system. The aim of this work was to develop new biomarkers of oxidative stress among the known DNA les ions by quantifying them in human biological fluids. For such a purpose, three types of DNA lesions were monitored : les ions due to oxidative stress, chlorinated lesions arising from inflammation processes and lesions generated subsequently to lipid peroxidation. The analytical method has been optimisel and the biological validation was performed using different pathologies such as diabetes, patients suffered from cancer and treated by radiotherapy and men with infertility. Preliminary results obtained show different levels of DNA lesions between patients and healthy controls. These results have to be confirmed in order to confirm the significance of these lesions as potential biomarkers. Other kinds of Datholoaies will be investigated usina the same approach.