Effets de la perte combinée de Cdk4, Cdk2 et Cdk6 sur la régulation du cycle cellulaire : génération et caractérisation de modèles murins knock-out inductibles

par Cédric Barrière

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et médicales. Biologie-Santé

Sous la direction de Pierre Dubus.

Soutenue en 2006

à Bordeaux 2 .

mots clés

• Cycle cellulaire
• Régulation cellulaire
• Cyclines
• Kinases dépendantes des cyclines
• Cancer -- Thérapeutique
• Fibroblastes
• Souris de laboratoire
• Cellules -- Croissance -- Régulation

Résumé

Afin de caractériser les redondances fonctionnelles entre les Cdks de la phase G1, nous avons généré des modèles murins Cdk4 ; Cdk2 et Cdk4 ; Cdk2 ; Cdk6. Ces mutants ont un développement harmonieux mais ont une survie limitée en raison de défauts tissus-spécifiques : insuffisance cardiaque en période périnatale pour les doubles mutants et anémie sévère autour de E12. 5 pour les triples mutants. Les fibroblastes embryonnaires (MEFs) déficients pour Cdk4 et Cdk2 ainsi que pour Cdk4 et Cdk6 s'immortalisent selon le protocole standard 3T3 et sortent de quiescence en réponse à des stimulations mitogéniques. PRb est phosphorylée dans les embryons et les MEFs doubles et triples mutants. Ainsi, nous avons montré que les Cdks de la phase G1 ne sont pas indispensables à la prolifération de la majorité des types cellulaires chez les mammifères. Dans ce contexte, nous proposons que Cdk1 est suffisante pour réguler la progression du cycle cellulaire.

Titre traduit

Cell cycle without Cdk4, Cdk2 and Cdk6 : generation and characterization of double conditional and triple knock-out mice

Résumé

To deeper understand the compensatory mechanisms existing between G1 Cdks, we have generated a double knock-out mouse for Cdk4 and Cdk2. 36 % of these mice successfully colmplete embryonic development. All double mutant mice, however, die soon after birth due to cardiac failure, likely due to a reduced cardiomyocyte number. In culture, Cdk4 and Cdk2 deficient embryonic fibroblasts (MEFs) become immortal upon continuous passage, display robust pRb phosphorylation as well as normal S phase kinetics and proliferation rates. Then, we have generated a triple deficient mouse strain for Cdk4, Cdk6 and Cdk2. The combined absence of all the G1 Cdks results in embryonic lethality after E12. 5 due to severe anemia while most of the embryonic cell types, including MEFs can still proliferate. In this context, we propose that Cdk1 could compensate for the absence of all G1 Cdks and is sufficient to drive the basic mammalian cell cycle allowing proliferation of most cell types.