Elaboration de vecteurs d'ADN, substrats de gélatinases

par Yves Lelièvre

Thèse de doctorat en Chimie moléculaire

Sous la direction de Daniel Scherman.

Soutenue en 2005

à Paris 6 .

Le président du jury était Max Malacria.

Les rapporteurs étaient Otmane Boussif, Benoît Frisch.

mots clés

• Polyéthylèneimine
• PEI [Poly Ethylèneimine]
• PEG [Poly Ethylèneglycol]
• Gélatinases
• ADN [Acide désoxyribonucléique]
• Thérapie génique
• Polyéthylèneglycol

Résumé

Un peptide synthétique, substrat de gélatinases A (MMP2) et B (MMP9 a été introduit par synthèses chimiques diverses entre deux polymères : une poly(éthyleneimine), (L-PEI) et un poly(éthylène glycol)5000, (mPEG5000). La conception des produits est basée sur l’inhibition de la transfection cellulaire d’ADN lié au L-PEI, par le mPEG, lorsque le peptide incorporé n’est pas clivé par ces enzymes. Un taux plus important de transfection du gène de la luciférase, transporté par ces substrats, est obtenu avec les cellules HT1080 qu’avec les cellules B16 et 3T3, alors que pas ou peu de transfection est obtenue avec les molécules-témoins. Ces résultats sont en rapport avec les activités gélatinases des surnageants de ces cellules, permettant l’élimination du mPEG. Ils laissent envisager un ciblage de gènes thérapeutiques de cellules cancéreuses avec un vecteur synthétique.

Titre traduit

Elaboration of DNA vectors as substrates of gelatinases

Résumé

A peptide, a substrate of gelatinase A (MMP2) and B (MMP9), has been incorporated between two polymers : a poly(ethyleneimine), (LPEI) and a poly(ethyleneglycol)5000, (mPEG), by several methods of synthesis. The conception of the substrates is based on the inhibition of the PEI bound DNA transfection, by mPEG, when no cleavage of the incorporated peptide occurs. A higher level of transfection of the luciferase gene, carried by these substrates, is obtained in the HT1080 cells than in the B16 and 3T3 cells, while no or few tranfection occurs with the control molecules. These results are in accordance with the gelatinase activities produced by the supernatant of these cells, allowing the discarding of the mPEG. It allows us to envisage a targeting of therapeutical genes into cancerous cells by mean of a synthetic vector.