Vectorisation de la ribavirine par les cyclodextrines : caractérisation physico-chimique des complexes et activité in vitro et in vivo sur le virus de la rougeole

par Nicolas Grancher

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire

Sous la direction de Véronique Venard.

Soutenue en 2005

à Nancy 1 , en partenariat avec Université de Nancy I. Faculté de médecine (autre partenaire) .

mots clés

• Rougeole
• Ribavirine
• Cyclodextrines
• Anticorps antiviraux
• Spectroscopie par résonance magnétique
• Rougeole
• Ribavirine
• Résonance magnétique nucléaire

Résumé

En dépit de la vaccination, la mortalité due au measles virus (MV) reste importante puisqu'elle est estimée à environ 1 million de morts par an, surtout dans les pays en voie de développement. Les complications graves, telle l'encéphalite aiguë, justifient une thérapeutique efficace. Le MV est sensible à la ribavirine (RBV), mais l'utilisation de cette molécule est limitée par sa toxicité. Pour y remédier, nous avons étudié des vecteurs capables de transporter les molécules antivirales: les cyclodextrines (CDs). Ce sont des oligosaccharides cycliques possédant une cavité hydrophobe. Les CDs sont capables de former des complexes d'inclusion avec de nombreuses molécules, améliorant leur biodisponibilité, leurs propriétés biologiques et diminuant leur toxicité. Dans un premier temps, nous avons cherché à caractériser les interactions entre la RBV et les CDs natives (α, ß, et γ). L'étude de la complexation a été réalisée soit en solution, par chromatographie liquide haute performance (CLHP) et par résonance magnétique nucléaire, soit à l'état solide, par thermogravimétrie, calorimétrie différentielle et par spectrophotométrie dans l'infrarouge. Nous avons montré par CLHP que la RBY forme un complexe de stœchiométrie 1: 1 avec chacune des CDs natives. Les constantes de stabilité de ces complexes sont: 1493 M-1 pour l'α-CD, 2606 M-1 pour la β-CD et 1179 M-1 pour la γ-CD. Dans un deuxième temps, l'activité antivirale de ces complexes a été évaluée sur les souches Edmonston et CAM/RB du MY, cultivées sur cellules Vero. Nous avons montré in vitro que la CI50 de la RBV sur les deux souches de MV est améliorée après complexation avec la Iβ-CD et l'a-CD de 2 fois et 5 fois, respectivement. La γ-CD n'apporte pas d'amélioration. Enfin, dans le but d'évaluer le bénéfice de cette complexation in vivo, nous avons développé un modèle d'encéphalite à MV chez la souris CBA/ca, inoculée par voie intracrânienne avec une épreuve de 1000 UFP.

Titre traduit

Vectorization of ribavirin by cyclodextrins : physicochemical characterization of the complexes and antiviral activity against measles virus in vitro nd in vivo

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