Identification et caractérisation du complexe PCC chez la levure S. Cerevisiae
par Elena Kisseleva-Romanova
Thèse de doctorat en Sciences biologiques. Génétique
Sous la direction de Domenico Libri.
Soutenue en 2004
à Paris 11 , en partenariat avec Université de Paris-Sud. Faculté des sciences d'Orsay (Essonne) (autre partenaire) .
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Résumé
Pour identifier de nouveaux facteurs d'épissage chez la levure S. Cerevisiae, nous avons cherché des suppresseurs multicopies du phénotype cryosensible associé à la mutation U5A dans la particule U1 snRNA (U1-5A). Nous avons isolé des plasmides contenant une région intergénique portant une petite ORF cryptique (appelée PCC1 ) qui contient un intron avec un site d'épissage 5' non canonique. Nous avons montré que PCC1 n'est pas impliqué dans l'épissage, mais que l'épissage de son intron est le principal facteur limitant pour la croissance en présence de la mutation U1-5A. Puisque PCC1 est un gène quasi essentiel, nous avons généré et étudié le mutant thermosensible pcc1-4. Notre analyse a révélé des défauts dans le cycle cellulaire et dans la réponse à la phéromone. Nos données suggèrent que PCC1 est directement impliqué dans la transcription et affecte l'expression de certains gènes, ce qui détermine les phénotypes mutants de pcc1. Le complexe PCC contient trois protéines additionnelles: Kae1p, une métalloprotéase putative, Bud32p, une kinase et Pcc2p. De multiples interactions génétiques et physiques entre ces protéines et les phénotypes des mutants suggèrent que le complexe PCC agit comme une unité dans la cellule et que sa fonction est conservée chez les métazoaires. Nous suggérons que l'activité d'endopeptidase de Kae1p et que l'activité kinase de Bud32p sont les fonctions moléculaires qui déterminent le rôle du complexe PCC dans la transcription. Nous montrons des interactions génétiques entre PCC1 et des facteurs de modification de la chromatine, ce qui suggère que le complexe PCC pourrait influencer la transcription via une fonction de modification de la chromatine.
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Titre traduit
Identification and characterisation of PCC complex in yeast S. Cerevisiae
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Résumé
To identify new splicing factors in yeast S. Cerevisiae, we searched for high-copy number suppressors of the cryosensitive phenotype associated to the U5A mutation in the U1 snRNA (U1-5A). We isolated plasmids containing an intergenic region bearing a cryptic, small ORF(that we named PCC1) containing an intron with a non-canonical 5' splice site. We showed that Pcc1p is not a new splicing factor, but that impaired splicing of its intron is the main limiting factor for growth in the presence of the U1-5A mutation. As PCC1 is a quasi-essential gene, we generated and studied the thermosensitive pcc1-4 mutant. Our analysis of this mutant revealed cell cycle progression defects and a defect in the response to pheromone. Our data suggest that Pcc1p is directly involved in transcription and affects the expression of several genes, which underlies the pcc1 mutant phenotypes. The PCC complex contains three additional proteins: Kaelp, a putative metalloprotease, Bud32p, a kinase and Pcc2p. Multiple genetic, additional physical interactions among these proteins and the phenotype of the mutants suggest that the PCC complex function as a unit in the cell. We show that the function of the complex is conserved in metazoans. The presence of a putative endopeptidase and a kinase are the most intriguing features of the PCC complex. We suggest that the endopeptidase activity of Kaelp and the kinase activity of Bud32p are the molecular functions that underlie the role of the PCC complex in transcription. We report genetic interactions between PCC1 and chromatin modifying factors, which suggest that the PCC complex might impact transcription through a chromatin modifying function.
