Thèse soutenue

Rôle de l'Importin alpha dans la formation de l'enveloppe nucléaire in vitro
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Auteur / Autrice : Virginie Hachet
Direction : Iain W Mattaj
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences biologiques. Biologie moléculaire de la cellule
Date : Soutenance en 2004
Etablissement(s) : Paris 11 en cotutelle avec European Molecular Biology Laboratory, Heidelberg
Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : European molecular biology laboratory (Heidelberg, Allemagne)
autre partenaire : Université de Paris-Sud. Faculté des sciences d'Orsay (Essonne)

Résumé

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Chez les eucaryotes, le noyau, contenant l'information génétique est délimité par l'enveloppe nucléaire. Au cours du cycle cellulaire, l'enveloppe nucléaire se désintègre puis se reforme autour des chromosomes. Les mécanismes responsables de la reformation de l'enveloppe nucléaire peuvent être étudiés en utilisant des extraits d'œufs de Xénope. Nous avons étudié le rôle de l'Importine alpha, molécule impliquée dans l'import de protéines contenant un signal de localisation nucléaire (NLS), dans ce processus. L'addition en excès de cette protéine ou de son substrat BSA-NLS inhibe la formation d'une enveloppe nucléaire autour de la chromatine. Ces résultats suggèrent un rôle de l'Importine alpha dans ce processus. De plus, le retrait de la protéine endogène des extraits d'œufs de Xénope inhibe l'assemblage de l'enveloppe nucléaire. Trop ou trop peu d'Importin alpha dans le système inhibe la reformation de l'enveloppe nucléaire in vitro. L'équilibre entre la quantité d'Importine alpha et de ses substrats NLS semble crucial pour ce processus. Nous avons démontré que l'Importine alpha pouvait s'associer aux membranes et que cette association était régulée par phosphorylation. L'Importine alpha cytosolique est plus phosphorylée que l'Importine alpha liée aux membranes. La phosphorylation de l'Importine alpha liée aux membranes induit la dissociation de celle-ci des membranes. L'utilisation de formes mutantes de l'Importine alpha qui soit ne lient pas les membranes, soit ne sont pas relarguées des membranes par phosphorylation, a permis de démontrer un rôle direct de la forme membranaire de l'Importine alpha dans la reformation de l'enveloppe nucléaire in vitro.