Influence de la contrainte de cisaillement sur la phosphorylation et la distribution de la protéine VASP dans les cellules endothéliales

Influence of different shear stress on phosphorylation and distribution of the protein VASP

• Auteur / Autrice : Ke Li
• Direction : Jean-François Stoltz, Xiong Wang
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Génie biologique
• Date : Soutenance en 2004
• Etablissement(s) : Vandoeuvre-les-Nancy, INPL

Mots clés

Mots clés contrôlés

Phosphorylation

Cisaillement (mécanique)

Phosphoprotéines

Cellules endothéliales

Résumé

La phosphoprotéine vasodilatrice stimulatée (VASP) appartient à la famille des protéines riches en prolines (ENANASP) qui est impliquée dans les changements du cytosquelette et la transduction du signal. La VASP s'associe avec les microfilaments, les points focaux d'adhésion, et les régions dynamiques de la membrane. Dans cette étude, l'expression, la phosphorylation et la redistribution des VASP dans les cellules endothéliales soumises à des contraintes de cisaillement ont été examinées. Après traitement par la contrainte de cisaillement, un double marquage a été utilisé pour montrer la relation entre l'organisation des fibres d'actine et la distribution des VASP. La technique du western blotting a été utilisée pour déterminer)e taux de phosporylation de la VASP. Dans les différentes types de cellules étudiés (ECV304, HUVEC primaire, lignée HUVEC), les ASP sont toujours localisées aux extrémités des fibres de stress. En condition statique les cellules contiennent un taux faible de VASP phosphorylées. Les cellules soumises à une contrainte de O,2Pa pour une durée de 1 heure présentent un pourcentage plus élevé de VASP phosphorylées. La contrainte de 1,OPa présente pratiquement le même taux de phosphorylation que les CEs à O,2Pa. Au contraire, la contrainte de 1,5Pa provoque une faible augmentation par rapport à celle observée en condition statique. De plus, cette phosphorylation montre un caractère transitoire et paraît réversible. Ces résultats suggèrent que la contrainte de cisaillement provoque la phosphorylation des VASP dans la CEs, mais cette phosphorylation dépend de l'intensité et de la durée de la contrainte.

Vasodilator-stimulated phosphoprotein (VASP) is a member of the proline rich Ena/VASP protein family that links the cell membrane proteins, signal transduction pathways, and the actin cytoskeleton. VASP is associated, in different cell types, with micro filaments, focal adhesions, cell-cell contacts, and highly dynamic membrane regions. It is supposed to have an important role in the regulation of actin dynamics. Ln this study the expression, redistribution, and the phosphorylation of VASP under flow conditions were examined. After treatment by shear stresses, a double labeling was used to visualize the relationship between the actin organisation and the distribution of VASP. Western blotting was used to detect the phosphorylation of VASP. Under different shear stresses, VASP in different cell types (ECV304, primary HUVEC, HUVEC cellline) always located at the ends of stress fibers. The shear stress of O. 2Pa elevated the quantity of the phosphorylated VASP, reached a peak and then decreased. The shear stress of 1. OPa bas similar tendency as that of O. 2Pa. On the contrary, the shear stress of 1. 5Pa caused a lower level phosphorylation of VASP. These results show that shear stress induces the phosphorylation of VASP in endotheliale cells, and this phosphorylation depends on the intensity and the duration of shear stress.