Cellules dendritiques et vaccination anti-idiotypique dans les lymphomes B : différentes étapes de validation pré-clinique

Dendritic cell-based immunotherapy in B-cell lymphoma : a preclinical study

• Auteur / Autrice : Hélène Rouard
• Direction : Marie-Hélène Delfau-Larue
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Immunologie
• Date : Soutenance en 2003
• Etablissement(s) : Paris 12

Mots clés

Mots clés contrôlés

Transduction

Lymphomes

Cellules dendritiques

Mots clés libres

Vaccin cellulaire

Résumé

Les lymphomes non-hodgkiniens de phénotype B sont des proliférations monoclonales de lymphocytes B avec localisation ganglionnaire ou extra- ganglionnaire. Les approches thérapeutiques classiques ne permettent pas d’obtenir des rémissions durables et la maladie est caractérisée par la fréquence des rechutes probablement causées par la persistance d’une maladie résiduelle biologiquement décelable. Ce travail pré-clinique décrit la préparation d’un vaccin cellulaire basé sur l’utilisation de cellules dendritiques comme cellules présentatrices d’antigène capables de favoriser l’induction d’une réponse cellulaire T anti-idiotypique. Nous décrivons la préparation ex-vivo de cellules dendritiques à usage thérapeutique différenciées à partir de monocytes du sang périphérique. Le procédé associe une nouvelle méthode de séparation physique des monocytes en système clos à usage unique et une culture en suspension des cellules dendritiques en milieu sans sérum. La différenciation des cellules dendritiques a été validée tout d’abord à partir de cellules obtenues chez des donneurs sains puis réalisée chez des patients atteints de lymphome. Nous montrons que les signaux de maturation donnés aux cellules dendritiques et leur capacité à synthétiser IL-12 sont essentiels pour l’activation des lymphocytes T des organes lymphoïdes secondaires. La délivrance de l’antigène tumoral dans les cellules dendritiques est facilitée par l’utilisation d’un vecteur adénoviral. L’introduction d’une séquence ubiquitine au transgène adénoviral codant pour des épitopes CD8+ favorise le ciblage des protéines synthétisées vers le protéasome et la présentation des épitopes CD8+ par les cellules dendritiques humaines transduites. Enfin nous montrons l’existence de plusieurs épitopes CD8+ dans les séquences idiotypiques de lymphome susceptibles de stimuler des lymphocytes T spécifiques.

Follicular B-cell lymphoma is characterized by the proliferation of mature B celis from germinal center. Malignant celis express a unique immunoglobulin idiotype as tumor-associated antigens. Despite recent advances in chemotherapy and radiation therapy, this malignancy remains incurable with a highly frequency of relapses probably given by residual tumor cells. One alternative to current treatment is to stimulate host antitumor immunity using professional antigen-presenting celis as dendritic cells loaded with tumoral antigen. Our preclinical study describes the ex-vivo preparation of dendritic ceils vaccine that should be used to induce idiotype-specific T lymphocyte after infusion. We describe a modified elutriation device to obtain highly enriched monocytes using a closed and single-use disposable set. Monocytes are differentiated into dendritic cells in serum free medium in non-adherent sealed bags. Monocytes enrichment and dendritic ceil culture conditions are amenable to Good Manufactoring Practice. Dendritic cells are differentiated from normal donor and B-cell lymphoma patients. IL-12 secreted after effective maturation signal using CD4O Ligarid and IFN-y stimulation induces the successful activation for T cells derived from secondary lymphoid organs. Adenovirus gene transfer is highly efficient as vector for the ex-vivo human dendritic cells transduction. We constructed a recombinant adenovirus encoding for CD8+ T celi epitopes and an ubiquitin sequence targeting the protein product towards the proteasome pathway. The addition of an ubiquitin sequence increased class I-restricted presentation of encoded peptides by human dendritic cells. This strategy could be useful for inducing an effective immune response against tumoral antigen. Finally, we identified several CD8+ T celi epitopes on immunoglobulin idiotype isolated from patients potentially useful to elicit CD8+ cytotoxic T cells.