Développement de Plasmides OriC chez les mollicutes, réplication, spécificité d'hôte et utilisation pour la génomique fonctionnelle

par Carole Lartigue

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et médicales. Biologie-Santé

Sous la direction de Alain Blanchard.

Soutenue en 2003

à Bordeaux 2 .

mots clés

• Plasmides
• Mycoplasmes
• Inactivation génique

Résumé

Des plasmides réplicatifs oriC contenant l'origine de réplication chromosomique ont été construits pour quatre mycoplasmes responsables de maladies animales : Mycoplasma pulmonis, Mycoplasma mycoides subsp. Mycoides LC (MmmLC), Mycoplasma mycoides subsp. Mycoides (MmmSC) et Mycoplasma capricolum. Comme précédemment montré pour un autre mollicute, Spiroplasma citri, ces plasmides se répliquent chez leurs hôtes respectifs, ce qui démontre la fonctionnalité des oriC prédites in silico. La spécificité d'hôte des plasmides a été analysée par transformation réciproque. Alors que M. Pulmonis et S. Citri n'ont pu être transformés qu'avec leur propre plasmide homologue, un échange de plasmide est toléré par MmmLC et MmmSC. M. Capricolum peut être transformé par les plasmides des trois membres du complexe mycoides, mais aussi par celui de S. Citri. L'efficacité des plasmides oriC comme outils pour la génomique fonctionnelle des mollicutes a été démontrée par l'inactivation ciblée de gènes.

Titre traduit

Development of OriC Plasmids for Mollicutes : Replication, Host Specificity and Use for Functional Genomics

Résumé

The construction of oriC plasmids was achieved for four mycoplasmas implicated in animal diseases : Mycoplasma mycoides subsp. Mycoides LC (MmmLC), Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC (MmmSC) and Mycoplasma capricolum. As previously shown for another mollicute, Spiroplasma citri, oriC plasmids were efficiently replicated in their respective hosts, demonstrating the functionality of in silico predicted oriC regions. The host specificity of these plasmids was investigated by heterologous transformations. While M. Pulmonis and S. Citri were only transformed by their own plasmids, plasmid exchange was tolerated between MmmLC and MmmSC. M. Capricolum was transformed by the plasmids from all three species belonging to the mycoides cluster and also by the S. Citri plasmid. The efficiency of oriC plasmids as tools for the functionnal genomics of mollicutes was shown by gene targeting experiments.