Démonstration "in vitro" d'un rôle de l'Androgen-Binding Protein sertolienne (ABP) sur la spermiogenèse

par Julie Della-Maria

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire et moléculaire

Sous la direction de Hubert Gérard.

Soutenue en 2002

à Nancy 1 , en partenariat avec Université Henri Poincaré Nancy 1. Faculté des sciences et techniques (autre partenaire) .

mots clés

• Proteines de liaison des androgènes
• Cellules de Sertoli
• Spermatogenèse -- Génétique
• Stéroïdes

Résumé

Nous avons étudié les effets de l'ABP sur la spermiogenèse, grâce à un modèle de coculture entre spermatides et lignées sertoliennes sécrétant ou non l'ABP. Nous avons montré, en dosant par RT-PCR quantitative l'expression de gènes de spermatides, une régulation positive de l'ABP sur l'expression de Tnp1 (condensation de la chromatine). Aucune régulation directe par l'ABP n'a été observée sur Spag4 (élaboration du flagelle). Nous avons ensuite criblé par DD RT-PCR l'expression de gènes de la spermatogenèse en présence de l'ABP. Parmi les fragments d'ADNc différentiellement exprimés, nous avons caractérisé un fragment amplifié à partir des cocultures et lignées sertoliennes identique à l'ARNm du gène de la calcycline de souris (99 %). Nous avons montré par RT-PCR en temps réel un effet négatif de l'ABP et des spermatides sur l'expression du gène de la calcycline par les cellules de Sertoli. Ces résultats démontrent pour la 1ière fois un effet de l'ABP sur la spermiogenèse in vitro. Cet effet semble modulé par la présence des stéroi͏̈des.

Résumé

In the aim to study the ABP effects on spermiogenesis, we have performed a coculture model involving rat ABP producing or non producing Sertoli cells and rat spermatids. We have shown, by quantitative RT-PCR, an ABP effect on Tnp1 gene expression (involved in nuclear compaction),however, no direct effect of ABP on Spag4 gene expression (involved in sperm tail formation) was observed. Secondly, we have screened spermiogenesis gene expression by DDRT-PCR in the presence of ABP. Among the differential cDNA bands, we have identified a cDNA fragment identical to the mRNA of the mouse calcyclin gene (99 %). By real-time RT-PCR, we have demonstrated a negative effect of ABP and spermatids on the Sertoli cell expression of this gene. Our results show for the first time an ABP effect by itself on spermiogenesis in vitro. This effect is modulated by steroid addition.