Tri intracellulaire de la vamp et etude de la proteine moteur kif 1a

par PATRICE TAUBENBLATT

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de Nicolas Morel.

Soutenue en 2001

à Paris 11 .

mots clés

Résumé

La vamp 2 est une proteine de la vesicule synaptique essentielle au phenomene d'exocytose. La formation d'un complexe entre la vamp et 2 proteines de la membrane presynaptique (syntaxine et snap 25) va permettre la fusion entre ces 2 structures membranaires et la liberation du neurotransmetteur. Dans un premier temps, nous nous sommes interesses a la localisation subcellulaire de la vamp a la terminaison nerveuse. Grace a une technique de marquages apres cryofracture, nous montrons que la vamp est associee a la membrane presynaptique. Ces resultats suggerent qu'en plus d'une localisation vesiculaire, la vamp est localisee au niveau de la membrane presynaptique. Cette localisation n'est pas due a une fusion des vesicules synaptiques avec la membrane presynaptique puisque la presence de la vamp n'est pas correlee avec celle d'autres marqueurs vesiculaires tels que la synaptophysine, sv2 ou vacht. Sur la preparation de membrane presynaptique, on peut mettre en evidence un complexe sds-resistant entre la vamp, la syntaxine et la snap 25. Suite a ce travail nous nous sommes demandes si des la sortie du trans golgi network, la vamp est cotransportee vers la terminaison nerveuse avec les autres proteines vesiculaires ou s'il y a deja eu une etape de tri. En immunopurifiant le precurseur des vesicules synaptiques via un anticorps anti-sv2, nous mettons en evidence la presence de proteines vesiculaires mais pas de la vamp (ni des t-snares). Toujours dans la logique de l'etude du trafic intracellulaire, nous nous sommes interesses a la kif 1a, proteine moteur impliquee dans le transport du precurseur des vesicules synaptiques vers la terminaison nerveuse. Nous avons tout d'abord clone le gene de la kif 1a. Apres avoir determiner la repartition cellulaire et subcellulaire de la kif 1a, notre problematique a ete de savoir comment est regulee l'accrochage/decrochage de la kif 1a a son cargo et aussi qu'elle est l'identite du recepteur responsable de la specificite d'accrochage.

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