Etude electrophysiologique des canaux calciques de type-b dans la membrane plasmique des myocytes cardiaques

par SYLVESTRE ANTOINE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de Alain Coulombe.

Soutenue en 2001

à Paris 11 .

mots clés

Résumé

Le ca 2 + intervient dans de nombreux processus cellulaires comme la contraction des cardiomyocytes, et la regulation fine de sa concentration est un enjeu capital pour le fonctionnement normal de la cellule. Pour reguler cette concentration, les cellules disposent de proteines membranaires : canaux ioniques, echangeurs et atpases, charges de reguler les echanges de ca 2 + entre le cytosol et le milieu extracellulaire. Or il a ete montre l'existence d'un influx calcique dans les cardiomyocytes en diastole, cela alors qu'aucune des proteines membranaires connues ne permet de l'expliquer. Les canaux calciques de type-b pourraient expliquer cet influx. Nous avons donc cherche a etudier ces canaux, afin de mieux comprendre leur fonctionnement ainsi que leurs implications dans les processus cellulaires. Nous avons montre leur existence dans la membrane des myocytes atriaux humains. Par ailleurs, ayant formule l'hypothese que ces canaux correspondent a un mode de fonctionnement canal de la pmca -l'atpase calcique membranaire chargee d'expulser du calcium du cytosol vers le milieu extracellulaire- nous avons montre l'existence d'un lien possible entre les canaux de type-b et la pmca : nous avons observe qu'un certain nombre de substances affectant l'activite de la pmca agissent egalement sur l'activite de ces canaux (eosine, la 3 +, alf 3 (inhibiteurs de la pmca), calmoduline (proteine activatrice de la pmca), atp, 5f10 (anticorps monoclonal specifique de la pmca)), et des experiences de reincorporation de proteine pmca purifiee dans des liposomes geants nous ont permis d'observer une activite canal calcique presentant certaines similitudes avec celle des canaux de type-b. Enfin, dans une derniere serie d'experiences nous avons mis en evidence leur implication dans le processus d'apoptose induite par le c 2-ceramide : activation directe des canaux de type-b par le c 2-ceramide, et modulation par la cpz et l'eosine de l'apoptose induite par le c 2-ceramide.

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