Caracterisation des domaines transmembranaires des glycoproteines e1 et e2 du virus de l'hepatite c

• Auteur / Autrice : Laurence Cocquerel
• Direction : Jean Dubuisson
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 2001
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Dans ce travail de these, nous nous sommes interesses aux etapes precoces de la formation de l'enveloppe virale du virus de l'hepatite c (vhc). Le genome du vhc code deux glycoproteines d'enveloppe appelees e1 et e2. Ces glycoproteines possedent un large ectodomaine n-terminal hautement glycosyle et sont ancrees dans les membranes par leur domaine transmembranaire (tm) c-terminal. Ces deux glycoproteines interagissent de maniere non covalente pour former un heterodimere e1e2 qui est suppose etre le composant proteique majeur de l'enveloppe du vhc. Lorsqu'il est exprime par des vecteurs d'expression heterologue, l'heterodimere e1e2 est retenu au niveau du reticulum endoplasmique (re). Dans notre travail, nous avons dans un premier temps cherche a identifier les determinants impliques dans cette localisation subcellulaire du complexe e1e2. Par le biais de constructions de proteines chimeriques entre les proteines d'enveloppe du vhc et des proteines normalement exportees a la membrane plasmique (cd4 et/ou cd8), nous avons montre que les domaines tms de e1 et e2 sont des signaux de retention stricte dans le re. Par une approche de mutagenese dirigee, nous avons ensuite montre que la presence d'un ou de deux residus charges, localises au milieu des domaines tms de e1 et e2, jouent un role essentiel dans la localisation subcellulaire de ces proteines. De plus, nous avons constate que ces residus charges sont egalement importants pour l'assemblage du complexe e1e2 ainsi que pour la fonction sequence signal situee dans la moitie c-terminale de ces domaines. Enfin, nous avons determine la topologie de ces domaines tms avant et apres clivage de la polyproteine du vhc et nous avons mis en evidence une dynamique structurale dans les etapes initiales de la biogenese des proteines d'enveloppe du vhc. L'ensemble de ce travail nous permet de proposer un modele reliant la multifonctionnalite des domaines tms des proteines d'enveloppe du vhc a leur dynamique structurale.