Synthèse de sondes et d'inhibiteurs pour l'étude de la O-glycosylation des protéines

par Patricia Busca

Thèse de doctorat en Chimie et physicochimie des composés d'intérêt biologique

Sous la direction de Olivier R. Martin.

Soutenue en 2001

à Orléans .

mots clés

• Glycosylation
• Glycoprotéines

Résumé

La O-glycosylation des protéines est une modification post-traductionnelle parmi les plus répandues chez les protéines secrétées et membranaires des mammifères. Les chaînes O-glycosidiques sont connues pour être impliquées dans de nombreux phénomènes de reconnaissance moléculaire qui contrôlent la vie de la cellule. Afin de mieux comprendre le fonctionnement et le rôle biologique de la O-glycosylation des protéines, les recherches se focalisent sur l'étude de la polypeptide-?-GalNAc-transférase, enzyme qui catalyse la première étape de ce processus biosynthétique. Dans ce cadre, nous avons réalisé la synthèse de différents analogues du substrat naturel de cette enzyme, l'UDP-GalNAc. Dans un premier temps, le groupement acétamido (NAc) en position 2 a été remplacé par un groupe trifluoroacétamido. D'autres modulations ont ensuite été réalisées sur les hydroxyles de l'unité GalNAc : les positions 3, 4 et 6 ont été méthylées ou désoxygénées de façon sélective. Les stratégies développées ont permis de préparer chaque sucre-nucléotide ciblé avec un nombre d'étapes et un rendement global convenables pour ce type de structures. La deuxiemme partie de ce travail a été consacrée à la purification des divers sucre-nucléotides ainsi obtenus. Pour ce faire, nous avons mis au point une nouvelle procédure de séparation par HPLC sur une phase stationnaire de type Carbone Graphitique Poreux (PGC). Cette technique s'est révélée efficace tant à l'échelle analytique que semi-préparative. Dans la dernière partie de ce projet, les sucre-nucléotides purifiés ont subi des tests enzymatiques de transfert et d'inhibition; et ce afin d'évaluer l'impact de chaque modification réalisée sur l'activité de la polypeptide-?-GalNAc-T1. L'ensemble des résultats obtenus montre que cette glycosyltransférase présente une sélectivité hors du commun, capacité probablement liée à l'extrême importance de son rôle biologique.

Titre traduit

Synthesis of probes and inhibitors for the study of the protein O-glycosylation process

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