Etude antigénique et moléculaire du virus de la paralysie chronique de l'abeille (Apis mellifera L. )

par Magali Ribiere

Thèse de doctorat en Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie

Sous la direction de Michel Pépin.

Soutenue en 2001

à Nice , en partenariat avec Laboratoire d'études et recherches sur les petits ruminants et les abeilles (laboratoire) .

mots clés

• Abeilles -- Maladies
• Virus -- Paralysie

Résumé

Le virus de la paralysie chronique est responsable d'une maladie infectieuse et contagieuse de l'abeille adulte. La reproduction expérimentale de la maladie a permis la sélection d'un isolat viral. Les tests d'infectivité ainsi que la production virale in vivo et la purification virale sur gradient de rénographine sont maîtrisés. La mise en évidence d'une protéine majoritaire de 30 kDa, poids moléculaire différent de celui décrit dans la bibliographie pour la protéine de capside du CPV, suggère une variabilité en fonction des isolats viraux. L'obtention d'un antisérum a révélé trois polypeptides supplémentaires de 75, 50 et 20 kDa associés à l'infection. Le diagnostic par ImmunoDiffusion en Gélose de la maladie déclarée a été validé par comparaison avec la technique de Western Blot. L'extraction du matériel génétique viral a permis d'isoler les deux segments d'ARN viraux majoritaires. Une première séquence partielle du virus de la paralysie chronique a été obtenue. La phase ouverte de lecture codée par ce fragment de séquence porte les motifs caractéristiques des ARN polymérases ARN dépendantes virales. Cette séquence présente des homologies avec deux familles virales : les Tombusviridae et les Nodaviridae. Un diagnostic de l'infection virale latente a été validé par détection de cette séquence par RT-PCR.

Titre traduit

Antigenic and molecular study of chronic bee paralysis virus (Apis mellifera L. )

Résumé

Chronic Paralysis Virus is the causative virus of an infectious and contagious disease of adult bees. A French strain of CPV was isolated by experimental reproduction of the disease. Infectivity tests, in vivo viral production and virus purification onto a Renografin gradient were realized. A major viral polypeptide of 30 kDa corresponding to the CPV capsid has been identified for this viral strain. This result differs from a previous study where viral capsid protein was described at 23. 5 kDa, suggesting a variability between strains. Three additional viral associated polypeptides of molecular weights 75, 50 and 20 kDa have been identified by Western Blotting. A diagnosis of the disease by an agar gel immunodiffusion test (AGID) can be performed in comparison to the Western Blotting as reference test. Extraction of the two main single-stranded viral RNA species was achieved. A first partial sequence of CP virus has been obtained: the Open Reading Frame presents common motifs conserved in sequences of viral RNA polymerase RNA dependent. Basic Local Alignement search show significant similarities with two different viral families Tombusviridae and Nodaviridae. A new specific diagnosis by RT-PCR based on detection of this sequence was performed to detect latent CPV infections.