Dynamique structurale de la protéine prion ovine

• Auteur / Autrice : Human Rezaei
• Direction : Pascale Debey
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biochimie
• Date : Soutenance en 2001
• Etablissement(s) : Paris, Muséum national d'histoire naturelle
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Sciences de la nature et de l'Homme - Évolution et écologie (Paris)
• Jury : Président / Présidente : Thérèse Garestier-Hélène
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Jean-Yves Cesbron, Thomas Haertlé
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Michel Morange, Jean Gagnon

Mots clés

Mots clés contrôlés

Bovins -- Maladies

Génétique

Maladies neurologiques

Creutzfeldt-Jakob, Maladie de

Encéphalopathies spongiformes subaiguës

Infections à prions

Protéines

Résumé

J'ai étudié l'effet, sur les propriétés physico-chimiques et structurales de la protéine prion ovine, de quatre polymorphismes associés respectivement à une forte sensibilité (V136R154Q171, A136R154Q171) et une forte résistance (A136H154Q171, A136R154R171) des animaux vis-à-vis la tremblante. J'ai mis au point une technique originale de purification/renaturation de la protéine PrP pleine longueur exprimée dans E. Coli, permettant d'obtenir en une seule étape de grandes quantités de protéine monomérique pure, homogène et stable. Les spectres de CD et les paramètres de dénaturation chimique et thermique montrent que VRQ est plus structuré et stable que ARR, résultat étonnant confirmé par des expériences de protéolyse ménagée. Une étude par microcalorimétrie différentielle a montré que, pour pH<4. 5 et pH>6. 0, la dénaturation a lieu en deux étapes avec des intermédiaires présentant certaines caractéristiques de la forme pathogène : haute teneur en structure b et capacité à se polymériser

I have analysed the effects on the physico-chemical and structural properties of ovine prion protein of 4 polymorphisms, which are respectively associated with a high sensitivity (V136R154Q171, A136R154Q171) and a high resistance (A136H154Q171, A136R154R171) of animal towards scrapie infection. I have first set-up an original purification/renaturation technique of the full-length protein expressed in E. Coli. This allowed us to obtain in one step high quantities or the pure monomeric, homogenous and stable protein. CD spectra and profiles of chemical and heat denaturation processes show that VRQ is more structured and more stable than ARR, an astonishing result whish was confirmed by mild proteolysis experiments. By differential microcalorimetry it was shown that, at pH<4. 5 and >6. 0, denaturation occurs in 2 steps with intermediates exhibiting some characteristics of the pathogenic form : high b sheet content and high tendency to polymerize