Quantification des protéines AgNOR par cytométrie de flux et analyse de leur dynamique dans les cellules induites à proliférer

• Auteur / Autrice : Bernard Jacquet
• Direction : Gérard Brugal
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Recherche clinique innovation technologie santé publique
• Date : Soutenance en 2001
• Etablissement(s) : Grenoble 1

Mots clés

Mots clés contrôlés

Nucléoles

Cycle cellulaire

Résumé

Les AgNORS sont des protéines nucléaires qui précipitent les sels d'argent. De nombreuses études ont montré que la durée du cycle cellulaire est d 'autant plus courte que la quantité d'AgNORS dans les cellules en cycle est élevée. La mesure simultanée des quantités d'AgNORS dans les cellules en cycle et de la proportion de cellules en cycle permet donc une mesure exhaustive de l'activité proliférative des populations cellulaires normales et pathologiques. Des travaux récents ont également montré la valeur pronostique des AgNORS pour les taux de survie à 5 ans dans de nombreux cancers. Toutefois, la quantification des AgNORS dans les cellules en cycle repose sur l'analyse d'image qui est une méthodologie coûteuse en temps et qui manque souvent de reproductibilité entre laboratoires. Nous avons donc développé et validé une nouvelle approche pour la quantification des AgNORS dans les cellules en cycle fondée sur la cytométrie en flux. Par ailleurs, nous nous sommes attachés à étudier les modifications quantitatives des trois protéines AgNORS UBF1, Nucléoline et B23 dans les cellules entrant en prolifération après hépatectomie partielle de rat. Les résultats montrent une augmentation des quantités d'UBF1 qui est corrélée à l'augmentation d'activité transcriptionnelle de l'ARN Polymérase de type 1 suivies par une augmentation des quantités de Nucléoline et de B23. L'activité de ribogenèse qui implique ces protéines apparaît donc bien liée directement au déroulement du cycle cellulaire.

AgNORS are nuclear proteins that interact specifically with silver salts. Numerous studies have shown that AgNORS are as large as the cell cycle time short. (. . . ) We have developed and validated a new approach to AgNORS quantitation based on flow cytometry. Moreover, we have studies the quantitative modifications of the three AgNORS proteins UBF1, Nucleolin and B23 in cells committed to proliferation after partial rat hepatectomy. Results show an increase in UBF1 quantity wich is correlated with an increase in transcriptional RNA Polymerase 1 activity followed by an increase in Nucleolin and B23 quantity. The ribogenesis activity that involves these proteins is thus confirmed as a driving force of the cell cycle progression.