Analyse des mecanismes d'instabilite des sequences repetees humaines de type minisatellites dans la levure s. Cerevisiae

par HELENE DEBRAUWERE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de ALAIN NICOLAS.

Soutenue en 2000

à Paris 6 .

mots clés

Résumé

Les minisatellites sont des sequences d'adn repetees en tandem, constituees de repetitions de 10 a 100 paires de bases qui peuvent etre instables dans la lignee germinale humaine. Pour identifier les mecanismes d'instabilite des sequences minisatellites, nous avons developpe un systeme-modele d'etude de l'instabilite du minisatellite humain ceb 1 chez la levure s. Cerevisiae. Dans un premier temps, l'objectif a ete de valider le modele levure. Comme chez l'homme, nous avons observe une stimulation de l'instabilite du minisatellite en meiose et la formation de rearrangements de tailles variees correspondant a des gains ou des pertes de motifs du minisatellite. Ensuite, nous avons montre que cette instabilite meiotique etait due a la formation de cassures double-brin au voisinage de ceb 1, quand celui-ci etait integre a proximite d'un site naturel d'initiation de la recombinaison. De plus, dans une souche msh2 pms1, nous avons mis en evidence des intermediaires de recombinaison au niveau du minisatellite, appeles heteroduplexes rearranges. L'ensemble de ces resultats nous a permis de proposer un modele d'instabilite meiotique des minisatellites humains dans la levure. Ensuite, nous avons observe, dans une souche heterozygote que l'insert minisatellite pouvait etre transfere sur le chromosome sauvage par un evenement de conversion genique dependant des proteines rad1/rad10. Enfin, nous avons initie une etude du mecanisme d'instabilite du minisatellite ceb 1 dans les cellules en croissance vegetative. Nous avons observe une forte instabilite des alleles ceb 1 dans les souches rad27. La mise en evidence de la colethalite de la deletion du gene rad27 avec tous les genes du groupe d'epistasie rad52 suggere que l'instabilite mitotique du minisatellite ceb 1 pourrait etre initiee par un defaut dans cette etape de la replication conduisant a la formation de cassures double-brin de l'adn et a la production des rearrangements lors de la reparation par recombinaison homologue.

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