Modelisation radiolytique de la peroxydation d'acides gras polyinsatures
par CAROLINE HAUVILLE
Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées
Sous la direction de Daniel Jore.
Soutenue en 2000
à Paris 5 .
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Résumé
Les lipides sont les constituants essentiels des membranes cellulaires et des lipoproteines. La comprehension des mecanismes impliques au cours de l'oxydation des lipides revet une importance capitale puisque la peroxydation lipidique est un processus qui intervient dans de nombreuses pathologies dans lesquelles le stress oxydant est implique. Le but de notre travail etait l'etude de systeme modeles simples constitues par des acides gras purs (acide linoleique 18:2, acide linolenique, 18:3, acide arachidonique, 20:4), en milieu micellaire a ph 10,5, soumis a une oxydation d'origine radiolytique. La radiolyse de l'eau est une methode tout a fait appropriee pour initier la peroxydation des acides gras puisqu'elle permet de generer de facon specifique des radicaux libres oxygenes, et en particulier des radicaux libres _oh, en quantite bien connue. Nous avons donc irradie (rayons de 1 3 7cs) des solutions aqueuses de chacun de ces acides gras, a ph 10,5, et nous avons suivi leur peroxydation par l'analyse des dienes conjugues (spectrophotometrie d'absorption), des substances reagissant avec l'acide thiobarbiturique (srtba) (spectrofluorimetrie) et des hydroperoxydes (chromatographie liquide haute performance couplee a la chimiluminescence). Cette derniere methode d'analyse a ete specialement adaptee a nos systemes modeles. La premiere partie de ce travail, consacree a l'etude de la peroxydation de l'acide linoleique (18:2), a permis de preciser l'influence de la dose d'irradiation, de la concentration initiale en acide gras, de la concentration en oxygene, du debit de dose et du ph. La deuxieme partie a porte sur l'etude comparative des marqueurs de peroxydation de deux autres acides gras, l'acide linolenique (18:3) et l'acide arachidonique (20:4). Les resultats observes ont permis de mettre en evidence la forte influence de l'agregation des molecules d'acides gras sous forme de micelles sur la nature et la quantite des produits de peroxydation. La troisieme partie a porte sur l'etude de la peroxydation des trois acides gras en milieu totalement homogene dans l'ethanol, sans structures micellaires. Enfin, la quatrieme partie du travail a ete consacree a l'etude des melanges d'acides gras, afin de tenter de se rapprocher des milieux biologiques. En particulier l'etude des melanges d'acide linoleique (18:2) et d'acide oleique (18:1) a ete effectuee de maniere a preciser les influences reciproques de ces deux acides gras. Les resultats obtenus montrent la encore que l'agregation des molecules est un facteur determinant pour la formation des produits de peroxydation radioinduits.
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