Utilisation de transporteurs chimériques pour l'étude de la dépendance vis-à-vis de Na + et Cl - de la capture de dopamine réalisée par les transporteurs neuronaux de la dopamine et de la noradrénaline

par Maria Syringas

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Jean-Jacques Bonnet.

Soutenue en 1999

à Rouen .

mots clés

• Chimère
• Noradrénaline
• Sodium
• Chlorure
• Captation
• Homme
• Dopamine
• Norépinéphrine
• Neurotransmetteurs
• Transporteurs de cations organiques
• Transport biologique
• Protéines de liaison

Résumé

Le processus de capture opéré par les transporteurs neuronaux humains de la dopamine (hDAT) et de la noradrénaline (hNET) est complexe. Il fait intervenir trois substrats : le neurotransmetteur correspondant, le Cl - et le Na +. Nous avons étudié les Na + et Cl - dépendances du transport de la dopamine réalisé par DAT, NET et des transporteurs chimériques issus de ces derniers, et exprimés par différents types cellulaires. Nous avons tout d'abord rééxaminé l'interaction cinétique entre la dopamine et le Cl - lors du transport opéré par hDAT dans des neuroblastomes humains. Nous avons confirmé que la capture de la dopamine était Cl - dépendante et que la liaison de la dopamine et du Cl - s'effectue selon un mécanisme séquentiel au cours duquel la liaison de la dopamine précède celle du Cl -. La recherche des différents domaines des hDAT et hNET impliqués dans la Na + et Cl - dépendance du transport a été réalisée grâce à 6 transporteurs chimériques. Les études de Na + et Cl - dépendance ont démontré d'une part que les caractéristiques de Cl - dépendance du processus de capture sont portées par les quatre derniers domaines transmembranaire des transporteurs et qu'un seul ion Cl - est impliqué, d'autre part que les caractéristiques de Na + dépendance sont principalement en relation avec les deux premiers domaines transmembranaires et secondairement avec les quatre derniers. Il est apparu que l'association des domaines centraux de hNET et hDAT nuit gravement au transport Na + dépendant. De plus, la différence de stoechiométrie apparente du Na + pour DAT et NET, 2 et 1 respectivement, semble être en relation avec la nature des deux premiers domaines transmembranaires. Il apparaît que la stoechiométrie apparente de deux Na + pour le DAT serait le produit de l'effet inhibiteur du Tris + (le cation de substitution). Ainsi les paramètres cinétiques apparents du DAT illustreraient en réalité l'interaction d'un Na + et d'un Tris + avec le hDAT. En conclusion les domaines impliqués dans la Na + et la Cl - dépendance du transport sont localisés à proximité des sites intervenant dans la liaison et le transport, permettant ainsi la création d'un environnement favorable à la liaison et au transport.

Pas de résumé disponible.