Propriétés d'organisation de l'ADN de la protéine ribosomique L24 de Bacillus subtilis

par Mohamed Zovine

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées

Sous la direction de Françoise Le Hegarat.

Soutenue en 1999

à Paris 11 , en partenariat avec Université de Paris-Sud. Faculté des sciences d'Orsay (Essonne) (autre partenaire) .

mots clés

Résumé

Deux polypeptides abondants, thermostables et basiques ayant des caracteristiques de proteines de type histone ont ete identifies dans le nucleoide de b. Subtilis. Il s'agit de la proteine l24 et de la proteine hbsu. L24 est la plus etudiee dans notre laboratoire depuis plusieurs annees. En plus de son association avec le nucleoide, l24 est une proteine ribosomique impliquee dans l'organisation de l'arnr 23s de la grande sous unite 50s du ribosome. Cette proteine a ete surproduite et purifiee. L'etude de son interaction avec l'adn a montre que cette proteine, comme la proteine de type histone hbsu, s'attache preferentiellement a l'adn double brin surenroule et le compacte fortement in vitro. Des etudes de phosphorylation in vitro ont montre que l24 est phosphorylee par un extrait de cellules de b. Subtilis en phase stationnaire. La proteine ainsi phosphorylee ne montre aucune affinite a l'adn in vitro laissant supposer des activitees differentes selon son etat de phosphorylation in vivo. Le gene rplx codant pour l24 est essentiel a la survie des cellules. Faute de pouvoir l'interrompre, il a ete place sous controle d'un promoteur inductible afin de moduler a volonte la concentration intracellulaire en l24. Le manque en proteine l24 dans les cellules de b. Subtilis affecte la croissance, la division et la morphologie des cellules et des nucleoides. Quant a l'effet de la surproduction de l24, il se traduit aussi par une alteration de la morphologie des cellules, conduit a un defaut de segregation des nucleoides et a un arret de la croissance. La localisation subcellulaire de l24 par immunodetection dans les cellules sauvages montre que celle ci se trouve associee aux poles des nucleoides au niveau des origines de replication la ou se trouve de fortes concentrations de ses cibles : l'arnr 23s et l'adn. L'ensemble de ces resultats suggere que l24 joue un role dans l'organisation et l'expression du genome bacterien du a son interaction avec l'adn et l'arn ribosomique.

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