Caracterisation de qtl specifiques de souche responsables de la methylation d'un transgene vhb chez la souris

par PASCALE VALENZA SCHAERLY

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Christine Pourcel.

Soutenue en 1999

à Paris 11 .

mots clés

Résumé

Le controle epigenetique par la methylation de l'adn joue un role fondamental dans la regulation de l'expression des genes. L'etude de transgenes soumis a des variations de methylation est un moyen d'identifier des facteurs genetiques controlant celle-ci. Nous avons decrit des modifications de niveaux d'expression et de methylation des sequences du virus de l'hepatite b (vhb) dans deux lignees de souris transgeniques (e36 et pfc80), en fonction du fonds genetique. Differents facteurs modificateurs ont ete mis en evidence et nous nous sommes interesses plus particulierement a l'effet du fonds genetique balb/c. En effet, chez les individus issus d'un croisement entre un male e36 et une femelle balb/c, le transgene est totalement methyle de novo et son expression est reprimee. Ceci serait du a l'action combinee de plusieurs genes modificateurs dont les alleles balb/c ont un effet hypermethylant. Afin de comprendre les mecanismes d'action de tels genes, nous avons caracterise plus finement la structure du transgene. Nous avons egalement etudie le niveau de methylation des regions situees a proximite de son site d'insertion. Seul le niveau de methylation du transgene semble modifie par l'effet du fonds balb/c. Dans le but de cartographier les genes modificateurs responsables, nous avons etudie les descendants du croisement en retour femelle f1 (balb/c c57bl/6) male e36 (c57bl/6). Nous avons mesure le pourcentage de methylation du transgene vhb de 256 souris, par la technique de southern-blot. Le genotypage d'une partie de ces individus a ete effectue par la technique d'amplification de microsatellites par pcr, sur l'ensemble du genome. Une confrontation des resultats de genotypage et de phenotypage a mis en evidence une region du chromosome 13 associee a une augmentation importante du niveau de methylation du transgene vhb. D'autres regions d'effet mineur semblent impliquees dans la variation du phenotype.

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