Caracterisation des domaines de la proteine facteur assistant-proteinase (hc-pro) des potyvirus impliques dans l'interaction avec l'arn et dans l'homodimerisation

par SILVIO URCUQUI INCHIMA

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de Anne-Lise Haenni.

Soutenue en 1999

à Paris 6 .

mots clés

Résumé

Le genome des potyvirus (famille potyviridae), est constitue d'un arn simple brin de polarite positive. Il code pour une polyproteine qui subit une maturation proteolytique grace a trois proteinases virales, p1, la proteine facteur assistant-proteinase (hc-pro) et nia. Les potyvirus sont transmis par des pucerons, processus qui implique la capside virale et hc-pro. La proteine hc-pro est aussi impliquee dans la replication du genome viral. Il a recemment ete montre que cette proteine presente une activite de fixation a l'arn. Il a egalement ete suggere que la forme active de hc-pro correspond a un homodimere. Pour mieux caracteriser les domaines impliques dans ces deux activites (fixation a l'arn et dimerisation), et mieux comprendre les mecanismes d'action de la proteine hc-pro, des deletions ont ete realisees dans le gene codant pour hc-pro du virus y de la pomme de terre, et les mutants clones, exprimes dans escherichia coli sous forme d'une proteine de fusion avec la proteine fixant le maltose et testees pour leur fixation a l'arn. Nous avons ainsi montre que la region centrale de hc-pro contient deux domaines de fixation a l'arn, designes domaines a et b. Le domaine b presente les caracteristiques des domaines rnp (comprenant rnp-2 et rnp-1) decrits dans une large famille de proteines qui a de l'affinite pour l'arn. La substitution d'une tyr dans le motif rnp-1 de hc-pro affecte l'affinite de la proteine pour l'arn. Hc-pro est la premiere proteine virale de plante decrite qui aurait un domaine rnp. Par la methode du double hybride de levure, nous avons egalement montre que la proteine hc-pro est capable d'interagir avec elle-meme. Les premiers 83 acides amines de la region n-terminale qui inclut un motif riche en cys sont necessaires pour cette interaction. La mutation de deux cys (cys 2 5 et cys 5 3) et de l'his 2 3 qui sont tres conserves dans ce motif parmi les hc-pro de tous les potyvirus affecte l'interaction proteine-proteine.

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