Etudes des criteres de rntr1 definissant les proprietes de liaison de la neurotensine et du sr48692 et son activation

par SEVERINE BARROSO

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Patrick Kitabgi.

Soutenue en 1999

à Nice .

mots clés

Résumé

La neurotensine (nt) est un peptide present a la fois dans le systeme nerveux central et a la peripherie. Deux recepteurs de la nt couples aux proteines g ont ete clones chez le rat la souris et l'homme. Ntr1 est un recepteur de haute affinite, 0,2 nm pour la nt et 3 nm pour l'antagoniste nonpeptidique sr 48692. Il est couple a la plc par l'activation de proteines gq-g11 et semble medier la majorite des effets connus du peptide. Par une approche de mutagenese dirigee associee a des etudes de relations structure-fonction et de modelisation moleculaire, nous avons etabli un modele tridimensionnel de l'interaction ntr1 avec la nt ou le sr 48692. Nos resultats montrent qu'une arg du tm6 est essentielle pour la liaison des deux ligands et que deux residus de la face extracellulaire des tm 4 et 6 sont en interaction avec les 2 residus c-terminaux de la nt ou avec l'adamantane du sr 48692. Plusieurs residus de la 3 e m e boucle extracellulaire e3, sont impliques dans la liaison de l'agoniste alors que la liaison de l'antagoniste implique des residus des 3 premiers tours des helices 6 et 7. La substitution en ala d'une phe du tm7 qui provoque une baisse d'affinite du sr 48692 mais pas de la nt, induit une activite constitutive a ntr1. Le sr 48692 se comporte comme un agoniste inverse sur ce recepteur mutant. Plusieurs substitutions dans e3 induisent des modifications de couplage du ntr1 : l'etat de haute affinite de la nt est plus sensible au gtp que celui du recepteur sauvage et le couplage a la plc semble medie par l'etat de basse affinite majoritaire. L'ensemble de ces resultats montre que les sites de liaison de la nt et du sr 48692 se localisent au niveau des tm 6 et 7 et de e3 qui les relie. Ces sites se recouvrent partiellement avec un residu essentiel commun. Dans la zone la plus enfouie du site du sr 48692 se localise une phe qui presente un role cle dans l'activation du rntr1. Cette activation est egalement modulee par des residus de e3, site de liaison de la nt.

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