Thèse soutenue

Analyse biochimique et cristallographique du complexe alpha/beta de l'importine humaine
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Auteur / Autrice : Gino Cingolani
Direction : Christoph W. Müller
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Physique
Date : Soutenance en 1999
Etablissement(s) : Grenoble 1

Résumé

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Le travail presente dans cette these decrit l'analyse structurale du complexe forme par les proteines humaines et importin. Le projet a debute par la caracterisation biochimique des 2 proteines, seules en solution, et du complexe qu'elles forment. Nous avons observe que dans le complexe la proteine importin est resistante a la chymotrypsine. La meme protection a ete observee lorsque la proteine -importin est incubee en presence d'un peptide, synthetise chimiquement, contenant les domaines ibb de la proteine importin. La co-cristallisation de la proteine -importin avec le peptide a donne naissance a 2 formes cristallines dans le groupe d'espace p21, diffractant respectivement a une resolution de 2. 5a et 2. 3a. La structure du complexe a ete resolue dans la premiere forme cristalline par diffusion anomale en utilisant la proteine -importin exprimee en presence de selenio-methionine. La structure a ensuite ete affinee a 2. 5 a de resolution. La deuxieme forme cristalline a ete resolue par remplacement moleculaire et le modele affine jusqu'a 2. 3 a de resolution. Un important changement conformationel a ete observe entre les deux formes cristallines donnant des informations sur la flexibilite interieure de la proteine importin. L'analyse de la structure du complexe ainsi que la comparaison avec les donnees biochimiques obtenues nous ont permis 4 observations majeures : - l'architecture caracteristique des proteines de la superfamille- a ete observe pour la premiere fois. - l'interaction intime entre les proteines et -importin a ete decrite au niveau moleculaire. - le double changement conformationel des proteines et importin observe par les methodes biochimiques a pu etre confirme grace a la structure tridimensionnelle. - une similarite de structure entre le complexe importin : domaines ibb et importin : sequence de localisation nucleaire (nls) a ete observe, confirmant une possible evolution commune de ces proteines.