Caracterisation et regulation de cdc25mm, facteur d'echange gdp/gtp de souris des proteines ras

• Auteur / Autrice : SORIA BAOUZ
• Direction : Andrea Parmeggiani
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

La proteine h-ras p21 est un element essentiel au controle de la division et de la differenciation cellulaire. Elle existe sous deux conformations : l'une inactive liee au gdp, l'autre active liee au gtp. Deux types de regulateurs determinent la concentration de la forme biologiquement active : les gaps (gtpase activating proteins) qui accelerent l'hydrolyse du gtp et les gefs (guanine nucleotides exchange factors) qui stimulent l'echange gdp/gtp. La proteine cdc25mm de souris contenant 1262 acides amines est un gef de la p21 qui est exprime essentiellement dans les cellules neuronales. Son role est lie a des recepteurs membranaires couples a des proteines g heterotrimeriques. Nous nous sommes interesses aux proprietes biochimiques de son domaine catalytique (c-cdc25mm) de 285 acides amines. La purification a homogeneite de ce domaine et du complexe p21 _c-cdc25mm, nous a permis de caracteriser la reaction d'echange. Nous sommes parvenus a purifier la forme entiere de cdc25mm en tant que proteine recombinante exprimee chez e. Coli et nous avons montre, dans un systeme in vitro, que la region amino terminale de la proteine inhibe l'activite du domaine catalytique. Nous avons teste l'effet de la calmoduline et de la calpaine, deux proteines dependantes du calcium, sur l'activite de cdc25mm, suggerant ainsi une connection entre l'activation de la voie ras/cdc25mm et la voie calcique dans la cellule neuronale. L'influence de la gap sur l'activite de cdc25mm a ete etudiee ; ces deux regulateurs ne peuvent pas interagir de facon simultanee avec la forme active de ras. L'activation de cdc25mm in vivo est associee a sa phosphorylation. Afin d'etudier l'effet de ces modifications post-traductionnelles, nous avons identifie des serines/threonines phosphorylees in vitro par la pka, a l'aide de la methode de degradation d'edman ainsi que de la spectrometrie de masse. Ces residus se trouvent regroupes pour la plupart dans une region contenant des sequences pest clivees par la calpaine. Nous avons initie une etude par mutagenese dirigee de cdc25mm en substituant des residus phosphoryles pour evaluer les effets fonctionnels de la phosphorylation.