Analyse et criblage d'oligonucléotides antigènes dirigés contre le VIH

Analysis and sceening of antigene oligonucleotides targeted aigainst HIV

• Auteur / Autrice : Françcois-Xavier Barre
• Direction : Annick Harel-Bellan
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie moléculaire
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Châtenay-Malabry, Ecole centrale de Paris

Mots clés

Mots clés contrôlés

Saccharomyces cerevisiae

Criblage pharmacologique

Psoralènes

VIH (virus)

Triple-hélice

Résumé

Des oligonucléotides appropriés peuvent reconnaître certaines séquences d'ADN double brin et former une triple élice d'acide nucléique. Ces oligonucléides formant des triples hélices (OTHS) ont de nombreuses applications en biologie, et pourraient notamment servir d'agents antigènes en ciblant, par exemple, l'action de ligands mutagènes sur des séquences d'ADN génomique. Ils auraient alors des applications en thérapie anti-virale ou anti-cancéreuse. Il est donc important de démontrer que des OTHs peuvent moduler spécifiquement l'action biologique d'un gène. Nous avons mis en place un système cellulaire pour l'analyse et le criblage d'OTHs antigènes dirigés contre une séquence conservée du génome du virus de l'immuno-déficience humaine (VIH), le polypurine tract (PPT). Le système est basé sur la levure comme modèle cellulaire eucaryote et le psoralène comme ligand mutagène couplé aux OTHs. Le psoralène est un intercalant bifonctionnel capalbe de générer plusieurs types de lésion. En utilisant des vecteurs rapporteurs, lésé in vitro grâce à un OTH couplé au psoralène puis transfectés dans les levures, nous avons montré que l'effet génotoxique et mutagène de ces OTHs dépend principalement du type de lésions introduit : un OTH de type phosphodiester permet de cibler l'action mutagène du psoralène, mais ne semble pas interférer avec les processus de mutagenèse de la cellule. En conséquence, ce système nous a permis d'apporter quelque éléments sur la mutagenèse des adduits du psoralène. Nous avons ensuite commencé l'étude de l'effet d'OTHs couplés au psoralène sur une cible endogène. Avec un OTH de type phospodiester, nous n'avons pas observé d'augmentation significative de la mutagenèse sur une telle cible. Ce résultat est sans doute à mettre en relation avec l'affinité relativement faible de ce type d'OTHs et leur sensibilité aux nucléases. Il est maintenant généralement admis que les stratégies basées sur des OTHs nécessitent, dans de nombreux cas, de modifier chimiquement ces derniers de façon à augmenter leur affinité et leur résistance aux nucléases. Dans ce cadre, nous avons entrepris la comparaison de l'effet d'un OTH de type phosphodiester à celui d'un OTH de phophoramidate. Les résultats obtenus avec ce dernier sont beaucoup plus prometteurs.