Etude structurale et fonctionnelle du promoteur du gene codant pour une proteine de secretion de la vesicule seminale de souris

par DENIS BROCHARD

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de CLAUDE JEAN.

Soutenue en 1998

à Clermont-Ferrand 2 .

mots clés

Résumé

Le gene codant pour msvsp99 (mouse seminal secretory protein of 99 amino-acids) est specifiquement exprime dans la vesicule seminale de souris, et est regulee au niveau transcriptionnel par les androgenes. Une analyse fonctionnelle des sequences 5 flanquantes du gene de msvsp99, conduite par transfection transitoire en cellules cv1, a permis de delimiter la region proximale 387/+16 comme etant suffisante pour conferer une expression androgeno-dependante au rapporteur cat. La recherche d'elements de reponse aux androgenes sur cette region par des techniques d'interaction adn/proteines a l'aide d'une proteine de fusion contenant le domaine de liaison a l'adn du recepteur humain des androgenes, ainsi que par mutagenese ciblee, nous a permis d'identifier l'arep (localise en position 208) comme etant indispensable a la sensibilite androgenique. Le fait que le fragment 261/+16 contenant l'arep ne permet pas une expression androgeno-dependante du gene cat, met en evidence la necessite d'une cooperation entre l'arep et des elements cis regulateurs. Une analyse deletionnelle conduisant a la suppression de cette cooperation suggere l'intervention de facteurs trans se fixant sur le fragment 387/329. L'analyse des regions 5 distales du gene de msvsp99 en transfection transitoire en cellules cv1, revele un effet inhibiteur de la sequence 824/+632 sur l'activite androgeno-dependante du fragment promoteur 387/+16. Ce fragment distal presente une forte activite promotrice en orientation inverse par rapport au gene de msvsp99, avec un site d'initiation de la transcription localise en position 639. L'analyse informatique des sequences disponibles en aval de ce site n'a pas permis de detecter la presence d'un gene. La recherche in vivo de messagers transcrits a partir de ce promoteur inverse a ete effectuee par rt-pcr sur des animaux male et femelle, adultes et nouveaux nes. Dans tous les tissus sexuels et non sexuels testes, aucun messager n'a ete mis en evidence. Enfin, le sequencage de la region 5 flanquante du gene de msvsp99 disponible a revele la presence d'un element line tronque suggerant comme pour les genes des semenogelines humaines, l'implication de ces elements dans l'apparition de la famille multigenique svs dont fait partie msvsp99.

Titre traduit

Structural and functional analysis of the promoter of a gene encoding a mouse seminal vesicle secretory protein

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